鲍曼不动杆菌耐药机制的研究进展＊
黄 梅，李 荣 综述，黎金凤 审校（四川省泸州市人民医院检验科 646000） 【期刊名称】检验医学与临床 【年(卷),期】2012(000)023 【总页数】3
【关键词】【关键词】 鲍曼不动杆菌； 耐药机制； 整合子； 灭活酶； 钝化酶； 膜渗透性
鲍曼不动杆菌是主要引起肺部感染、血流感染、尿路感染和插管相关感染等。由于有多重耐药和泛耐药菌株，所以该菌的致死率高，是重症感染患者的主要致死原因。鲍曼不动杆菌耐药机制复杂且有多种机制并存，主要包括整合子介导的耐药基因的产生，产生多种灭活酶和钝化酶，膜蛋白改变导致外膜通透性下降，药物主动泵出系统。现就以上机制作综述如下。
1 整合子介导的多重耐药机制
整合子－基因盒的概念是由国外学者Hall等［1］于20世纪90年代提出。认为其是细菌基因组中可以移动的遗传物质，即可以运动的DNA分子，是细菌的天然克隆与表达［2］。通过整合酶整合游离的耐药基因盒，从而造成细菌的多重耐药。鲍曼不动杆菌基因组为3.98Mb，有3 800多个开放阅读框架［3］，易于接受外源性基因，可容纳大量耐药基因盒。
1.1 整合子的结构和种类 整合子由5′末端（5′CS），3′末端（3′CS），以及中间可变序列组成。5′CS携带编码整合酶的基因intⅠ和一个启动子基因片段，启动子有P1和P2两种，大多数整合子都含有P1启动子，少部分含有P2启动子，3′CS结构则因整合子类型不同而异。
根据整合酶的不同可将整合子分为6类，其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子与耐药性有明显关系，研究得也较多。Ⅰ类整合子3′CS包括3个ORFs，季铵盐化合物溴乙锭耐药基因（qacEΔl），磺胺耐药基因（sulⅠ）和功能尚不清楚的ORFs，是临床分布最广的一类整合子［4］。临床分离的耐药菌的整合子大多为Ⅰ类整合子。Ⅱ类整合子以Tn7及其家族为代表，其整合酶基因intI2被一个终止密码子中断，是缺陷的intI基因，表达的intI2与intI1同源性小于50%，可以在不动杆菌、志贺菌、沙门菌中检出Ⅱ类整合子［5－6］。Ⅲ类整合子由 Arakawa等［7］在耐亚胺培南的粘质沙雷菌上发现，其整合酶由320个氨基酸组成，与intI1同源性为61%，常携带编码β－内酰胺酶bla的基因盒。Ⅳ类整合子是在20世纪90年代由Rowe－Magnus等［8］在霍乱弧菌的基因组中发现，因其含有179个基因盒，故被称为超级整合子（SI），目前尚未发现其直接与多重耐药有关，但可能是多重耐药整合子的祖先。
1.2 基因盒的结构和种类 基因盒是较小的、可以移动的DNA分子，常以环状结构独立存在，当被整合子捕获并整合后才可进行转录。不同基因盒的结构和功能不同，长度为262～1 459bp，但基本结构是一致的（见图1）。每个基因盒由1个结构基因和3′CS毗邻的1个不完全反向重复序列（特异性重组位点）attC（又称59be）组成。attC的长度为57～147bp［9］，并且含有一个被整合酶识别的特异性整合位点［10］。每个attC位点的两端由核心位点和反向核心位点组成，核心位点GTTRRRY（R为嘌呤，Y为嘧啶）位于attC的右侧，而互补的反向核心位点RYYYAAC位于attC的左侧。基因盒的分类由顾兵和童明庆［11］根据美国生物技术信息中心资料（截止2005年1月）结合文献对耐药基因盒的种类及耐药情况作了归纳（见表1）。
1.3 基因盒的捕获和表达 整合子捕获基因盒是靠整合酶催化反应完成的。整合酶的识别位点有2个，一个是整合子中整合酶基因相邻的intI部位，另一个是位于基因盒的intC位点。游离的基因盒以闭合环状结构存在于细胞中，通过整合酶的催化以线性结构结合于特异性位点，进行位点特异性重组，精确插入整合子中。整合酶催化的重组反应不仅可发生在intI和intC之间，也可发生在2个intC和intT之间，但以intI和intC之间的重组效率最高［12］。通常整合过程为特异的可逆过程，整合的线性基因盒可被重新切下，恢复环状结构，并可能整合于其他整合子中。通过intI和intC之间的位点特异性重组，使得耐药基因从一个整合子向另一个整合子传递，完成整合子中耐药基因的累积重排和流动。
1.4 整合子－基因盒对鲍曼不动杆菌耐药性的作用 整合子可捕获一个或多个基因盒，因此表现出对抗菌药物的多重耐药性，临床上出现的多重耐药的鲍曼不动杆菌和泛耐药鲍曼不动杆菌与整合子对耐药基因的累积是分不开的。Johnannes等［13］对48株鲍曼不动杆菌进行整合酶基因聚合酶链反应（PCR）发现有50%测试菌携带有Ⅰ类整合子，并且发现这些菌株表现的多重耐药性要比整合子阴性的菌株更为严重，由此推测整合子对鲍曼不动杆菌耐药性的作用。Gomac等［14］检测意大利6家医院分离的在流行病学上无相关的多重耐药鲍曼不动杆菌36株，发现44%（16株）测试菌存在Ⅰ类整合子，其中13株携带的基因盒中基因排列一致，即aacC1－or－fX－orfX，－aadAla，在PCR产物2.2Kb中还发现携带有blaOXA－20基因。Ruiz等［15］从西班牙6家医院分离的鲍曼不动杆菌含有Ⅰ类整合子，并且发现携带有不同基因盒的4种Ⅰ类整合子。这些基因盒包括aacC1、aacA4、aadA1、
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