紫外分光光度法测定维生素一、实验目的
1、了解紫外分光光度计的主要结构及工作原理。
C
片中的V
C
含量
2、掌握紫外分光光度计的操作方法及紫外定性定量分析方法
3．掌握紫外分光光度法测定水中维生素C含量的原理与分析条件的选择。
二 、实验原理
维生素C是人体重要的维生素之一，它影响胶元蛋白的形成，参与人体多种氧化-还原反应,并且有解毒作用。人体不能自身制造Vc，所以人体必须不断地从食物中摄入Vc，通常还需储藏能维持一个月左右的Vc。缺乏时会产生坏血病，故又称抗坏血酸。
维生素C属水溶性维生素，分子式C6H8O6。分子结构中具有二烯醇结构，其结构如下：
它易溶于水，微溶于乙醇，不溶于氯仿或乙醚。分子中的二烯醇基具极强的还原性，性质活泼，易被氧化为二酮基而成为脱氢抗坏血酸。维生素C分子结构中有共轭双键，固在紫外光区有较强的吸收。
根据维生素C在稀盐酸溶液中，Vc吸收曲线比较稳定，在最大吸收波长处，其吸收值A的大小与维生素C的浓度c的大小成正比，符合郎伯—比尔定律：
A=εbc
其中A为吸收度；c为试样中维生素C的浓度，mol·L-1；b为吸收池厚度，cm；ε为摩尔吸收系数，L·mol-1·cm-1。若在最大吸收波长下，首先绘制出维生素C在最大吸收波长下的标准曲线，然后在相同条件下测定出吸光度A，由测得的吸光度A在标准曲线上查得浓度,换算为药品中含量(mg/片)。。
三、实验仪器与试剂
1．仪器TU1810型紫外分光光度计。电子天平1台，研钵1个，50mL容量瓶7只和500mL容量瓶1只,10mL移液管2支，100mL、1000mL烧杯2只。
2．试剂维生素C标准品(抗坏血酸)，市售维生素C含片（100mg/片），冰醋酸，蒸馏水。
四、实验步骤
1.配制维生素C标准贮备液500mL(浓度约为1.5×10-4mol/L):
称取约0.0132g维生素C标准品于100mL的烧杯中，用超声波助溶后定容于500mL容量瓶中，摇匀，配成贮备液。
2.配制标准系列：
分别吸取上述贮备液1.00、2.00、4.00、8.00、16.00mL于50mL容量瓶中，用蒸馏水定容。 3.确定最大吸收
以蒸馏水为参比，在320～220nm范围内测出维生素C的吸收光谱，并确定最大吸收波长。 4.绘制标准曲线
以蒸馏水为参比，用上述标准系列溶液在?max处分别测出吸光度，并绘制标准曲线。 5．样品测定
取3片Vc片剂研细,准确称取0.02g于100mL烧杯中,以去离子水稀释至500mL。移取样品溶液5.00mL于50mL容量瓶中,定容。在?max处测吸光度。
五、实验结果和讨论
1.绘制吸收曲线，确定最大吸收波长。
2.以标准溶液浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线图。
3.在标准曲线的纵坐标上找到试液的吸光度，然后在横坐标处查得相应VC的浓度。 4.计算维生素片剂中VC的含量。
六、注意事项
1.维生素C会缓慢氧化成脱氢抗血酸，所以每次实验时必须配制新鲜溶液，并滴加几滴醋酸。 2.使用石英比色皿。
3.实验结束时，先关氘灯，再关主机电源开关。
七、思考题
1.具有哪些结构特征的有机物常在紫外光区有吸收? 2.VC结构中有哪些生色团？那些助色团？
实验一紫外分光光度法测定维生素C片中的VC含量
