欧阳化创编 2021.02.06
检测两种卵白质之间相互作用的实验办法比较
时间：2021.02.06 创作：欧阳化
1. 生化办法
●免疫共沉淀 免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究卵白质相互作用的经典办法。改法的优点是卵白处于天然状态，卵白的相互作用可以在天然状态下进行，可以避免认为影响；可以别离获得天然状态下相互作用的卵白复合体。 缺点：免疫共沉淀同样不克不及包管沉淀的卵白复合物时候为直接相互作用的两种卵白。另外灵敏度不如亲和色谱高。 ●FarWestern
又叫做亲和印记。将PAGE胶上别离好的凡百样品转移到硝酸纤维膜上，然后检测哪种卵白能与标识表记标帜了同位素的诱饵蛋鹤产生作用，最后显影。 缺点是转膜前需要将卵白复性。
2. 等离子概略共振技术（Surface plasmon resonance）该技术是将诱饵卵白结合于葡聚糖概略，葡聚糖层固定于几十纳米厚的技术膜概略。当有卵白质混合物经过时，如
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果有卵白质同“诱饵”蛋鹤产生相互作用，那么两者的结合将使金属膜概略的折射率上升，从而招致共振角度的修改。而共振角度的修改与该处的卵白质浓度成线性关系，由此可以检测卵白质之间的相互作用。该技术不需要标识表记标帜物和染料，平安灵敏快速，还可定量阐发。缺点：需要专门的等离子概略共振检测仪器。
3. 双杂交技术 原理基于真核细胞转录因子的结构特殊性，这些转录因子通常需要两个或以上相互自力的结构域组成。辨别使结合域和激活域同诱饵卵白和猎物卵白形成融合卵白，在真核细胞中表达，如果两种卵白可以产生相互作用，则可使结合域和激活域在空间上充分接近，从而激活陈述基因。 缺点：自身有转录功能的卵白会造成假阳性。融合卵白会影响卵白的真实结构和功能。晦气于核外卵白研究，会招致假隐性。
5. 荧光共振能量转移技术 指两个荧光法色基团在足够近（<100埃）时，它们之间可产生能量转移的现象。荧光共振能量转移技术可以研究分子内部对某些安慰产生的构象变更，也能研究分子间的相互作用。它可以在活体中检测，很是灵敏，辩白率高，能够检测年夜分子的构象变更，能够定性定量的检测相互作用的强度。 缺点 此项技术要求发色基团的距离小于100埃。另外设备昂贵，还需要融合GFP给卵白标识表记标帜。
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另外还有交联技术（cross－linKing），卵白质探针技术，噬菌体展示技术（Phage display）以及生物信息学的办法来检测卵白质之间相互作用。
1，
酵母双杂交 15
酵母双杂交系统是将待研究的两种卵白质的基因辨别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子（如GAL4等）的DNA结合结构域基因和转录激活因子（如GAL4等）激活结构域基因，构建成融合表达载体，从表达产品阐发两种卵白质相互作用的系统
酵母双杂交的原理是，把陈述基因 HIS3 和 l a c Z 整合到酵母细胞基因组中，并受转录因子
GAL4 的调控表达。一旦 GAL4 卵白结合到 HIS3 和 l a c Z 调控序列相应的位点，则启动陈述基
因的表达。通过检测陈述基因的表达判断阳性或阴性。实际应用中，把 GAL4 基因分红两个部
分： DNA 结合区（ gal4 DNA binding domain, GBD）和激活区(gal4 activating domain, GAD）。分 别把 GBD 和 GAD 构建到两个不合的载体上，并能表达相应的两个融合卵白（ GBDX 和
GADY）。然后把 GBDX 和 GADY 两种载体共转染到带有陈述基因的酵母细胞中。当 GBDX
融合卵白中 X 卵白与 GADY 融合卵白中 Y 蛋鹤产生
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检测两种蛋白质之间相互作用之欧阳化创编
