仪器 BeckmanCouｌtｅr EPIＣS XL/FＣ5０0／Aｌｔｒa 样本制备: 1)按照要求，分别向已编好号的试管中加入10/２0 ul单克隆抗体和同型对照 2）分别向试管中加入混匀的100u1抗凝血。 3)混匀，避光,室温孵育2０-３0分钟 4)溶血:ａ. OptｉLｙse Ｃ(按说明书步骤溶血) b. 使用COULTER Ｑ—ＰREP制备系统 开机---显示READY灯亮-－-选择35SEC灯亮--－开门---放入试管关门--－自动进行溶血--－显示ＲＥADY灯亮---开门-－-取出试管-－-再进行下一个样品测定。 (*溶血前确认A／B/C管路充满并能打出液体) 5)上机测样(可根据样本情况选择洗或不洗上样) 报告结果 报告百分数 操作性能 精密度 批内五次重复CV＜2% 参考值（百分数) CD3+／HLＡ-DR＋ 3.1±1．３% ＣD3＋/CD25+ １5.9±3.7% CD３＋/ＣD４５RO＋ 3.３±1.55％ ＣD3+/CD45RＡ+/CD４＋ 20．51±3.６４% 临床意义 1.ＨＬA-DR、CＤ２5、ＣＤ69是T细胞活化各个时期表达的标志性抗原，对其进行检测可以判断出疾病的进程,有助于临床疾病的辅助诊断、预后和治疗。如活化状态的监测是对机体移植免疫状况判断的最主要依据,有助于临床选择治疗方案,CD２５+／CＤ3+ >5-10%提示排斥、持续增加提示应作病理活检；CD3＋/HLA-DR+增加5－1０%但不伴CＤ25增加提示MＣV感染。 ２.正常机体内各种T细胞之间以及与其他免疫细胞之间在数量上保持一定比例，如果它们之间比例失调就会引起免疫功能紊乱,将导致机体免疫力下降和感染性疾病、自身免疫病、肿瘤等疾病的发生，检测淋巴细胞各种亚群有助于疾病的诊断、预后和治疗。CD４５RＡ、ＣＤ４5RＯ均为T细胞的辅助分子,CＤ４5ＲＡ+纯真型Ｔ细胞当免疫力下降时减少；CD45RO＋记忆型T细胞对第二次抗原刺激极其敏感,通常在急性感染疾病中增加，在慢性感染疾病中减少。
方案（Ｐrｏｔｏcoｌ) 同淋巴细胞亚群检测 结果(Rｅsulｔ） HLA－B27测定
方法 流式细胞仪（BｅckmanCｏultｅr,贝克曼库尔特) 原理: 双色直接免疫荧光法。将HLＡ-Ｂ2７-FIＴC/ HＬA－Ｂ7-PＥ单克隆抗体加入到全血中,与白细胞膜上相应的抗体结合，经过溶血、洗涤（和固定)等步骤后,在流式细胞仪上进行分析,测定HLA－B7阴性而HＬA－B２7阳性细胞的平均荧光强度和所占的百分比。 标本采集与处理 受检者的准备 检查对象生活饮食处于日常状态。 采集部位 静脉采血 抗凝剂 ＥDTＡ或肝素抗凝血 要求 1．样本量1ｍl。 2.样本应在采集后6小时内处理，冷冻的标本不能用。 3.样本白细胞计数应在４.0-10．0×109/Ｌ之间。若＞1０.0×１09/Ｌ, 样本需要稀释,用PＢＳ稀释；若<４.0×１09/Ｌ，应分离单个核 细胞。 ４.溶血样本不能用。 试剂 品牌 剂型 规格 贮存 贝克曼库尔特 成分 1:单克隆抗体 液体 1ML 2—8℃ (HLA-B２7/HLＡ－B7 No．ＩM15０2 同型对照IgG1／IｇG２a Ｎo.ＩM１38９)) 2:全血溶血试剂 液体 Ａ：甲酸 液体 70MＬ 室温 B:碳酸钠等 液体 32ML 室温 Ｃ:多聚甲醛 液体 1４ML 室温 3：鞘液 液体 20L 室温 4：清洗液 液体 5L 室温 ５:荧光微球 液体 10ML 2-8℃ 质控品 ＢEKAＭANCＯULＴＥＲ产品,未开瓶的试剂于2-８℃保存，可在有效期内保持稳定,稀释的试剂于2－8℃可稳定２周;每天校准一次:遇特殊情况随时进行校准。
仪器 ＢeckmanＣｏulｔｅｒ EＰICS XL／FC500/Ａｌtｒa 样本制备： １)按照要求,分别向已编好号的试管中加入20 ul单克隆抗体和同型对照(IgＧ2a-ＦITＣ/ＩgG１－PＥ） 2)分别向试管中加入混匀的100u1抗凝血。 3)混匀,避光,室温孵育20-3０分钟 4)溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血) ｂ. 使用COULＴＥR Ｑ—ＰＲEP制备系统 开机---显示REAＤY灯亮--－选择35ＳEC灯亮－--开门---放入试管关门-－-自动进行溶血－--显示RＥADY灯亮--－开门---取出试管---再进行下一个样品测定。 (＊溶血前确认A／B／C管路充满并能打出液体) 5)洗、离心、上机测样（备注: 测B２7一定要至少洗一遍方可上机检测) 报告结果 报告阴阳性 操作性能 精密度 批内五次重复CV<２% 参考值 阳性:HＬA-B2７阳性而HLＡ-B7阴性细胞的平均荧光强度在5.0以上,阳性率>９0％。 临床意义 HLA复合体位于第6号染色体的短臂上,该区DNA片段长度约30０0-4000ＫB，占人体整个基因的１/3０00,HLA-B27是HLA-I类基因中B位点上的一个等位基因，与多种疾病具有相关性,尤其是强直性脊柱炎。HＬA-B２７基因属于?型MHC基因,所有有核细胞上均有表达，尤其是淋巴细胞表面含量丰富,人们发现HＬＡ-B27抗原表达与强直性脊柱炎有高度的相关性,超过90%的强直性脊柱炎患者HLA-B27抗原表达阳性，而正常人群中仅5-10%的认为阳性。由于强直性脊柱炎症状与许多疾病相类似,临床上难以确诊,因此ＨLA－B27检测在疾病的诊断中具有重要意义,ＨLA-B27的检测是该疾病诊断和鉴别诊断中的一个重要指标。
流式细胞仪操作规程SOP
