人可溶性P选择素(sP-selectin)ELISA试剂盒利用方式
检测范围： 96T 1μg/L -32μg/L
利用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中可溶性P选择素(sP-selectin)含量。 实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人可溶性P选择素(sP-selectin)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入可溶性P选择素(sP-selectin)，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，通过完全洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的可溶性P选择素(sP-selectin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人可溶性P选择素(sP-selectin)浓度。 试剂盒组成 1 2 3 4 5 6 30倍浓缩洗涤液 酶标试剂 酶标包被板 样品稀释液 显色剂A液 显色剂B液 20ml×1瓶 6ml×1瓶 12孔×8条 6ml×1瓶 6ml×1瓶 6ml×1/瓶 7 8 9 10 11 12 终止液 标准品（64μg/L） 标准品稀释液 说明书 封板膜 密封袋 6ml×1瓶 ×1瓶 ×1瓶 1份 2张 1个 标本要求 1．标本搜集后及早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。假设不能马上进行实验，可将标本放于-20℃保留，但应幸免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可依照以下图表在小试管中进行稀释。 32μg/L 16μg/L 8μg/L 4μg/L 2μg/L 5号标准品 4号标准品 3号标准品 2号标准品 1号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样：别离设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶
标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽可能不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：警惕揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反映（现在蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止
液后15分钟之内进行。 操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在座标纸上绘出标准曲线，依照样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中掏出应在室温平稳15-30分钟后方可利用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保留。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不阻碍结果。
3．各步加样均应利用加样器，并常常校对其准确性，以幸免实验误差。一次加样时刻最好操纵在5分钟内，如标本数量多，推荐利用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量太高（样本OD值
大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释必然倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性利用，以幸免交叉污染。 6．底物请避光保留。
7．严格依照说明书的操作进行，实验结果判定必需以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各类废弃物都应按传染物处置。 9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保留条件及有效期 1．试剂盒保留：；2-8℃。 2．有效期：6个月
人可溶性P选择素sPselectinELISA试剂盒利用方式
