右侧的显示是Bradford特有的。左侧的任务栏在“Software Overview”中有详细描述。
光谱显示口显示当前样品的数据，使用基座检测的结果是标准化到1mm光程下的数据，而使用比色皿检测时是选择的光程下的数据。光程的信息显示在Y轴上。 Data tab－显示当前样品的数据
Standard Curve tab－显示标准曲线，可以显示R2值和标准曲线。标准曲线类型包括多参数方程，线形，多级方程等，默认的选择是线形。
Valid/Invalid Curve－显示是否有最小量的标准品已经被检测了。当满足要求时，标准曲线的状态将从无效的状态（红色）变成有效曲线（绿色）。
注意：这状态仅仅表示检测样品数已经满足标准曲线需要的最少样品点。标准曲线状态不指示标准曲线的拟合情况，要包括一个比较宽的检测浓度范围，需要更多的标准品点。
Sample radio button－当构建的标准曲线满足要求时，样品ID位臵将能够可以选择，在检测样品前应输入样品名称。
Standards radio button－选择上后可以输入标准名称和浓度。 Concentration ug/ml－当前样品的浓度单位。
Absorbance at 595nm－考马斯亮蓝染料复合物在595nm处吸光值。
Bradford标准曲线
Bradford法分析时需要标准曲线。
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标准曲线例子：50:1 试剂/样品体积
一个最简单的标准曲线可以有两个点组成，包括两个标准品点或者一个参考点（仅仅有Lowry试剂，没有蛋白）和一个标准品点。
最多可包括7个标准品点，检测各个标准品点没有顺序。
标准品点只能在样品检测时添加到标准曲线中，当开始检测第一个样品，就不能向标准曲线中添加标准品点了。
在样品检测前可以随机删除任何一个标准品点。右击结果表格可以删除一个标准品或者删除标准品结果表格。在重复孔数据上点击右键可以删除特定标准品的重复。
在第一个样品开始检测后，删除的标准品不能被添加或者重新检测。
要建立一个新的标准曲线，必须先建立一个新的工作薄。如果把样品添加到以前的工作薄中，可以使用以前构建好的标准曲线。建议在添加数据到工作薄之前要按照试剂生产厂家的说明来构建标准曲线。
注意：如果选择以前保存的工作薄，所有样品的浓度计算都是基于工作薄中的标准曲线进行的。每个工作薄只能保存一个标准曲线。
进行Bradford检测
参考试剂生产厂家说明准备样品。
零点参考标准是与其他标准品和样品同样的样品/试剂比例进行操作，只是里面没有蛋白。
按照厂家操作说明准备标准品和样品。使用的空白对照要与标准品，样品的pH值和盐离子浓度一样。
标准品的浓度范围要覆盖全面样品的浓度范围。
操作过程：
1． 从主菜单中选择Protein Bradford，如果出现波长确认窗口，确保检测臂放下并点
击OK.
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2． 在右侧表格中输入每个标准品的浓度，软件可以最多检测7个标准品。参考和标准
品可以检测多个重复。
注意：标准曲线最少需要2个标准品点或者一个0参考点和一个标准品点。推荐检测多个标准品，标准品的浓度范围要覆盖样品的浓度范围。
3． 选择Add to report把检测的结果自动保存到当前报告中去。默认的设定是把所有样
品添加到报告中。要把样品结果保存到工作薄中，必须在检测样品前把Add to report选上。
? 选择文件下拉选择中的Use current settings as default来节约每个新的工作薄
的设定时间。
4． 选择Overlay spectra来同时显示多个光谱图。
5． 使用合适的缓冲液做空白对照。通常使用纯水做为空白对照。
a) 基座模式：取1－2ul纯水加到基座上，放下检测臂并点击Blank。
b) 比色皿模式（仅2000c）：按照比色皿生产厂家的建议加入适量的空白溶液，
按照仪器上标记的光路放心，插入比色皿。
注意：用任何模式检测时检测臂都必须放下，在用基座检测时，建议把比色皿从仪器上取出，以保证检测臂放到合适的位臵。
6． 在标准品标签下，选择一个标准品，按上面做空白一样加样，点击Measure开始检
测，要在所有标准品检测完成后再做样品检测。 7． 在标准品检测完成后，点击Sample按键，输入样品名称，加2ul样品到检测基座上，
点击Measure开始检测样品。在检测标准品和样品之间不需要再做空白对照。 注意：每次检测的样品必须是新鲜加入的！
检测完成以后：
? 用干净的无尘纸擦拭干净上下基座，这样仪器就可以进行下一个样品的检测了。 ? 当使用比色皿模式时，取出比色皿，彻底清洗干净然后再进行下一个样品检测。
Protein Pierce 660nm
总论
Thermo Scientific公司的Protein Pierce 660nm试剂是快速的准确定量蛋白。这方法主要用来定量那些含有还原剂或者去污剂的总蛋白浓度。
Protein Pierce 660nm试剂和方法 这个方法试剂15：1的试剂/样品体积比例。当使用基座检测时，推荐使用4ul样品和60ul试剂。
按照试剂生产厂家推荐的方法来准备标准品和样品，确保所有样品和标准品在相同的时间和温度下进行。
试剂盒生产厂家同时可以提供蛋白标准品（BSA）。
Pierce 660nm分析检测范围
当使用4ul样品和60ul试剂时，Pierce 660nm可以检测的浓度范围从50ul/ml到125ug/ml。参考“Measure Ranges”获得更多信息。
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检测需要的样品量
虽然检测的样品量不是很关键，但在使用基座检测时要确保形成液柱，这样在上下基座之间形成样品桥。
决定液体表面张力的主要因素时溶液中水分子之间的氢键。通常情况下，水中的物质，如：蛋白，盐离子，去污剂等都会通过破坏水分子之间的氢键来减小表面张力。虽然对于大部分样品来说，1ul的量就足够用于检测了，我们建议在做蛋白检测时由于表面张力下降做好使用2ul的样品来检测以保证形成液柱。
在使用比色皿检测时，要确保液面的高度高于光线通过比色皿的高度，参考比色皿生产厂家的说明来确定需要的液体量。
基座再生
带有表面活性剂的溶液或者试剂会破坏检测基座上液柱的形成。在这种情况下，使用Nanodrop基座再生复合物来快速再说基座表面。关于PR-1的其他信息请参考网页。
独特的屏幕特征
右侧的显示是Protein Pierce 660nm特有的。左侧的任务栏在“Software Overview”中有详细描述。
光谱显示口显示当前样品的数据，使用基座检测的结果是标准化到1mm光程下的数据，而使用比色皿检测时是选择的光程下的数据。光程的信息显示在Y轴上。 Data tab－显示当前样品的数据。
Standard Curve tab－显示标准曲线，可以显示R2值和标准曲线。标准曲线类型包括多参数方程，线形，多级方程等，默认的选择是线形。
Valid/Invalid Curve－显示是否有最小量的标准品已经被检测了。当满足要求时，标准曲线的状态将从无效的状态（红色）变成有效曲线（绿色）。
注意：这状态仅仅表示检测样品数已经满足标准曲线需要的最少样品点。标准曲线状态不指示标准曲线的拟合情况，要包括一个比较宽的检测浓度范围，需要更多的标准品点。
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Sample radio button－当构建的标准曲线满足要求时，样品ID位臵将能够可以选择，在检测样品前应输入样品名称。
Standards radio button－选择上后可以输入标准名称和浓度。 Concentration ug/ml－当前样品的浓度单位。
Absorbance at 660nm－考马斯亮蓝染料复合物在660nm处吸光值。
Protein Pierce 660nm试验工作薄
当从主菜单中选择蛋白Pierce 660nm时，会出现下列信息：
虽然标准曲线吸光值可以不通过检测而通过手动来输入，但最好还是按照试剂厂家的建议来对每次检测构建标准曲线。
要建立一个新的标准曲线。必须建立一个新的工作薄。如果要使用前面保存的工作薄，那所有新检测的样品将使用工作薄中已经保存的标准曲线。 注意：每个工作薄只能保存一个标准曲线。
标准曲线
标准曲线例子：15:1 试剂/样品体积
每次进行Protein Pierce 660nm检测时需要通过软件构建标准曲线。虽然标准曲线能够保存并通过软件再使用。建议用户按照试剂生产厂家的建议来构建标准曲线。
在标准曲线检测前必须检测一个标准曲线。建议使用染料而不加蛋白来做空白对照和零点参考样品。
注意：这和NanoDrop 2000/2000c做其他蛋白定量不一样，其他蛋白定量方法使用水
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Nanodrop 2000中文操作手册
