注意：标准曲线最少需要2个标准品点或者一个0参考点和一个标准品点。推荐检测多个标准品，标准品的浓度范围要覆盖样品的浓度范围。
3． 选择Add to report把检测的结果自动保存到当前报告中去。默认的设定是把所有样
品添加到报告中。要把样品结果保存到工作薄中，必须在检测样品前把Add to report选上。
? 选择文件下拉选择中的Use current settings as default来节约每个新的工作薄
的设定时间。
4． 选择Overlay spectra来同时显示多个光谱图。
5． 使用合适的缓冲液做空白对照。通常使用纯水做为空白对照。
a) 基座模式：取1－2ul纯水加到基座上，放下检测臂并点击Blank。
b) 比色皿模式（仅2000c）：按照比色皿生产厂家的建议加入适量的空白溶液，
按照仪器上标记的光路放心，插入比色皿。
注意：用任何模式检测时检测臂都必须放下，在用基座检测时，建议把比色皿从仪器上取出，以保证检测臂放到合适的位臵。
6． 在标准品标签下，选择一个标准品，按上面做空白一样加样，点击Measure开始检
测，要在所有标准品检测完成后再做样品检测。 7． 在标准品检测完成后，点击Sample按键，输入样品名称，加2ul样品到检测基座上，
点击Measure开始检测样品。在检测标准品和样品之间不需要再做空白对照。 注意：每次检测的样品必须是新鲜加入的！
检测完成以后：
? 用干净的无尘纸擦拭干净上下基座，这样仪器就可以进行下一个样品的检测了。 ? 当使用比色皿模式时，取出比色皿，彻底清洗干净然后再进行下一个样品检测。
Protein Lowry
总论
Lowry法蛋白定量是一个应用非常广泛的蛋白定量方法。与其他比色法一样，Lowry法进行蛋白定量前也需要构建一个 标准曲线。
Lowry法是蛋白与硫酸铜在碱性环境下反应形成铜-蛋白复合物。Folin－Ciocalteu试剂可以有效的还原铜复合物，产生与蛋白量成比例的蓝色产物，可以在650nm检测，405nm处校准。试验中使用的试剂可以从多个厂家购买。
Lowry法检测范围
要准确准备标准品，推荐使用20ul的蛋白样品和100ul Lowry试剂来做反应。在Nanodrop2000/2000c上可以检测的样品浓度范围是从0.20mg/ml到4mg/ml。
按照试剂盒生产厂家的说明来准备标准品和样品。在所有操作过程中要保持每个样品处理时间和环境温度一致。
可以同时从试剂盒生产厂家购买用于构建标准曲线的蛋白标准品（BSA）。由于NanoDrop2000/2000c基座检测的浓度范围比常规检测更大，在构建标准曲线时需要构建比厂家建议更宽的标准曲线范围。
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检测需要的样品量
虽然检测的样品量不是很关键，但在使用基座检测时要确保形成液柱，这样在上下基座之间形成样品桥。
决定液体表面张力的主要因素时溶液中水分子之间的氢键。通常情况下，水中的物质，如：蛋白，盐离子，去污剂等都会通过破坏水分子之间的氢键来减小表面张力。虽然对于大部分样品来说，1ul的量就足够用于检测了，我们建议在做蛋白检测时由于表面张力下降做好使用2ul的样品来检测以保证形成液柱。
在使用比色皿检测时，要确保液面的高度高于光线通过比色皿的高度，参考比色皿生产厂家的说明来确定需要的液体量。
基座再生
带有表面活性剂的溶液或者试剂会破坏检测基座上液柱的形成。在这种情况下，使用Nanodrop基座再生复合物来快速再说基座表面。关于PR-1的其他信息请参考网页。
独特的屏幕特征
右侧的显示是Protein Lowry特有的。左侧的任务栏在“Software Overview”中有详细描述。
光谱显示口显示当前样品的数据，使用基座检测的结果是标准化到1mm光程下的数据，而使用比色皿检测时是选择的光程下的数据。光程的信息显示在Y轴上。 Data tab－显示当前样品的数据
Standard Curve tab－显示标准曲线，可以显示R2值和标准曲线。标准曲线类型包括多参数方程，线形，多级方程等，默认的选择是线形。
Valid/Invalid Curve－显示是否有最小量的标准品已经被检测了。当满足要求时，标准曲线的状态将从无效的状态（红色）变成有效曲线（绿色）。
注意：这状态仅仅表示检测样品数已经满足标准曲线需要的最少样品点。标准曲线状态不指示标准曲线的拟合情况，要包括一个比较宽的检测浓度范围，需要更多的标准品点。
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Sample radio button－当构建的标准曲线满足要求时，样品ID位臵将能够可以选择，在检测样品前应输入样品名称。
Standards radio button－选择上后可以输入标准名称和浓度。 Concentration mg/ml－当前样品的浓度单位。
Absorbance at 650nm－Cu-BCA复合物在650nm处吸光值。
Lowry标准曲线
Lowry法分析时需要标准曲线。
标准曲线例子：5:1 试剂/样品体积
一个最简单的标准曲线可以有两个点组成，包括两个标准品点或者一个参考点（仅仅有Lowry试剂，没有蛋白）和一个标准品点。
最多可包括7个标准品点，检测各个标准品点没有顺序。
标准品点只能在样品检测时添加到标准曲线中，当开始检测第一个样品，就不能向标准曲线中添加标准品点了。
在样品检测前可以随机删除任何一个标准品点。右击结果表格可以删除一个标准品或者删除标准品结果表格。在重复孔数据上点击右键可以删除特定标准品的重复。
在第一个样品开始检测后，删除的标准品不能被添加或者重新检测。
要建立一个新的标准曲线，必须先建立一个新的工作薄。如果把样品添加到以前的工作薄中，可以使用以前构建好的标准曲线。建议在添加数据到工作薄之前要按照试剂生产厂家的说明来构建标准曲线。
注意：如果选择以前保存的工作薄，所有样品的浓度计算都是基于工作薄中的标准曲线进行的。每个工作薄只能保存一个标准曲线。
进行Lowry检测
参考试剂生产厂家说明准备样品。
零点参考标准是与其他标准品和样品同样的样品/试剂比例进行操作，只是里面没
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有蛋白。
按照厂家操作说明准备标准品和样品。使用的空白对照要与标准品，样品的pH值和盐离子浓度一样。
标准品的浓度范围要覆盖全面样品的浓度范围。
操作过程：
1． 从主菜单中选择Lowry，如果出现波长确认窗口，确保检测臂放下并点击OK. 2． 在右侧表格中输入每个标准品的浓度，软件可以最多检测7个标准品。参考和标准
品可以检测多个重复。
注意：标准曲线最少需要2个标准品点或者一个0参考点和一个标准品点。推荐检测多个标准品，标准品的浓度范围要覆盖样品的浓度范围。
3． 选择Add to report把检测的结果自动保存到当前报告中去。默认的设定是把所有样
品添加到报告中。要把样品结果保存到工作薄中，必须在检测样品前把Add to report选上。
? 选择文件下拉选择中的Use current settings as default来节约每个新的工作薄
的设定时间。
4． 选择Overlay spectra来同时显示多个光谱图。
5． 使用合适的缓冲液做空白对照。通常使用纯水做为空白对照。
a) 基座模式：取1－2ul纯水加到基座上，放下检测臂并点击Blank。
b) 比色皿模式（仅2000c）：按照比色皿生产厂家的建议加入适量的空白溶液，
按照仪器上标记的光路放心，插入比色皿。
注意：用任何模式检测时检测臂都必须放下，在用基座检测时，建议把比色皿从仪器上取出，以保证检测臂放到合适的位臵。
6． 在标准品标签下，选择一个标准品，按上面做空白一样加样，点击Measure开始检
测，要在所有标准品检测完成后再做样品检测。 7． 在标准品检测完成后，点击Sample按键，输入样品名称，加2ul样品到检测基座上，
点击Measure开始检测样品。在检测标准品和样品之间不需要再做空白对照。 注意：每次检测的样品必须是新鲜加入的！
检测完成以后：
? 用干净的无尘纸擦拭干净上下基座，这样仪器就可以进行下一个样品的检测了。 ? 当使用比色皿模式时，取出比色皿，彻底清洗干净然后再进行下一个样品检测。
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Protein Bradford
总论
Bradford是常用的蛋白定量的方法。它通常用于浓度比较低的蛋白的浓度检测。与其他比色法一样，Bradford法检测蛋白浓度时必须构建一个标准曲线。
Bradford法是根据蛋白能够使考马斯亮蓝尝试吸收位移来检测蛋白浓度的，一般在595nm处检测吸光值。蛋白-染料复合物在595nm处检测并在750nm处做标准化。可以从多个厂家购买相应的试剂盒。
Bradford法检测范围
商业化的Bradford试剂盒有两种蛋白检测范围：
常规检测使用试剂/蛋白样品的体积比为50：1，这个试剂盒检测范围从0.10mg/ml到8.0mg/ml（BSA）。最佳线形范围在0.01-1mg/ml。当使用基座检测时，推荐使用4ul样品和200ul Bradford试剂。
微量检测使用1：1试剂/样品，可以检测蛋白浓度范围从15ug/ml至125ug/ml。要准备足够的样品来做基座检测，建议使用10ul样品和10ulBCA试剂（使用PCR管）。 按照试剂盒厂家建议的操作来构建标准曲线和样品准备。确保在所有检测过程中使用相同的时间和温度。
注意：如果试验操作温度高于60度，最好使用2倍的试验体积，这样避免挥发导致的样品浓缩。
在Bradford试剂盒中同样包括用于构建标准曲线的标准品。由于NanoDrop
2000/2000c能够检测比常规比色皿检测更高的浓度，用户需要使用比厂家推荐的标准品更高的浓度。
检测需要的样品量
虽然检测的样品量不是很关键，但在使用基座检测时要确保形成液柱，这样在上下基座之间形成样品桥。
决定液体表面张力的主要因素时溶液中水分子之间的氢键。通常情况下，水中的物质，如：蛋白，盐离子，去污剂等都会通过破坏水分子之间的氢键来减小表面张力。虽然对于大部分样品来说，1ul的量就足够用于检测了，我们建议在做蛋白检测时由于表面张力下降做好使用2ul的样品来检测以保证形成液柱。
在使用比色皿检测时，要确保液面的高度高于光线通过比色皿的高度，参考比色皿生产厂家的说明来确定需要的液体量。
基座再生
带有表面活性剂的溶液或者试剂会破坏检测基座上液柱的形成。在这种情况下，使用Nanodrop基座再生复合物来快速再说基座表面。关于PR-1的其他信息请参考网页。
独特的屏幕特征
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Nanodrop 2000中文操作手册
