要删除一个用户定义的染料，选择这个染料，直接点击键盘上的删除键来删除，或者右击鼠标选择删除。预先编写好的染料在编辑器中被锁定的，是不能编辑和删除的。默认的设定是Dye1为Cy3，Dye2为Cy5。
独特的屏幕特征
右侧的显示是Protein & Labels特有的。左侧的任务栏在“Software Overview”中有详细描述。
光谱图显示当前样品校准到10mm光程下的吸光值。 光谱显示右侧包括下拉参数“
Sample ID－输入样品名称的位臵，应在检测前输入样品名称。
Type－六个预设样品可供选择来进行蛋白分析和浓度计算。可以在Type旁边的下拉框中进行这些选择。默认的是1Abs＝1mg/ml。
Ext.Coeff，E1% L/gm-cm－当选择Other Protein（E1%）会出现这个项目，在检测前应输入合适的消光系数。
ε/1000 and M.W. (KDa)－当Other protein（E & MW）被选择时可以显示，在检测前应输入合适的参数。
Conc－根据蛋白在280nm处的吸光值和选择的消光系数计算出来的浓度值。浓度单位可以从旁边的下拉框中选择。默认的单位是mg/ml。
Dye1（2）：选择染料，默认的选择是：染料1（Cy3），染料2（Cy5）。 ? Abs－每个染料在1mm光程下的吸光值。
? uM－基于每个荧光染料的消光系数计算出来的浓度，可以在下拉框中选择浓
度单位。
A280（10mm光程）－蛋白在280nm处的吸光值。显示的数据被标准化到10mm光程。
注意：显示的A280值并不同于样品在280nm下的吸光值（以750nm波长为参比波长）。A280值在计算蛋白浓度时考虑到染料对吸光值的影响，采用染料校准因子对检测结果进行了校准，吸光值校准采用选择的校准波长和750nm基线。从而显
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示的A280值和用来计算的蛋白浓度的吸光值不一样。
Analysis correction－在进行浓度计算之前，分析波长下的吸光值要减去校准波长下的吸光值。这仅仅影响报告中的蛋白浓度。
Sloping Dye Correction－选择这项时，染料检测波长下的吸光值要减去400nm到750nm校准波长下的 吸光值。这仅仅影响报告的染料的吸收峰和浓度。
进行Protein & Labels检测
1． 从主菜单中选择Protein & Labels，如果波长确认窗口打开，确保检测臂放下并点
击OK。
2． 从样品下拉框中选择检测样品的类型，默认的设定为1 Abs＝1mg/ml。 3． 选择浓度单位，默认的单位是mg/ml。
4． 使用下拉菜单来选择染料，默认的染料1为Cy3，染料2为Cy5。如果蛋白仅标记一
种染料，染料2选择为None。
5． 默认的重镉酸盐校准波长为340nm，可以选择其他的校准波长，或者去选择
Baseline correction来不做光谱校准。
? 选择文件下拉选择中的Use current settings as default来节约每个新的工作薄
的设定时间。
6． 选择Add to report来自动把所有检测结果添加到当前报告中。默认的设定是把所有
样本添加到报告。在进行样品检测前必须把Add to report框选上才能把样品结果数据保存到工作薄中。
7． 选择Overlay spectra来同时显示多个光谱图。 8． 使用合适的缓冲液做空白对照。
a) 基座模式：取1－2ul空白溶液加到基座上，放下检测臂并点击Blank。
b) 比色皿模式（仅2000c）：按照比色皿生产厂家的建议加入适量的空白溶液，
按照仪器上标记的光路放心，插入比色皿。
注意：用任何模式检测时检测臂都必须放下，在用基座检测时，建议把比色皿从仪器上取出，以保证检测臂放到合适的位臵。
9． 输入样品名称，按做空白一样加入样品点击Measure开始检测。 注意：每次检测的样品必须是新鲜加入的！
检测完成以后：
? 用干净的无尘纸擦拭干净上下基座，这样仪器就可以进行下一个样品的检测了。 ? 当使用比色皿模式时，取出比色皿，彻底清洗干净然后再进行下一个样品检测。
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Protein BCA
总论
BCA是一种通过比色来检测非纯蛋白的浓度的方法，它通常用于稀释的蛋白浓度检测以及那些含有在紫外区域有光吸收的杂质的蛋白的浓度检测。不象Protein A280，BCA法需要在蛋白定量前构建一个标准曲线。
BCA法是检测Cu+1离子的方法，在碱性环境下，Cu＋2离子会被蛋白还原为Cu+1离子。两个联喹啉二羧酸BCA分子和一个Cu+1离子形成紫色的螯合物，这样在有蛋白存在情况下，Cu-BCA形成的螯合物在562nm出有最大光吸收，并以750nm光系数为标准化。可以从Thermo Fisher 购买BCA和CuSO4试剂盒。
BCA法检测范围
商业化的BCA试剂盒有两种蛋白检测范围：
常规检测使用试剂/蛋白样品的体积比为20：1，这个试剂盒检测范围从0.20mg/ml到8.0mg/ml（BSA）。当使用基座检测时，推荐使用4ul样品和80ulBCA试剂。 微量检测使用1：1试剂/样品，可以检测蛋白浓度范围从0.01mg/ml至0.20mg/ml。要准备足够的样品来做基座检测，建议使用10ul样品和10ulBCA试剂（使用PCR管）。 按照试剂盒厂家建议的操作来构建标准曲线和样品准备。确保在所有检测过程中使用相同的时间和温度。
注意：如果试验操作温度高于60度，最好使用2倍的试验体积，这样避免挥发导致的样品浓缩。
在BCA试剂盒中同样包括用于构建标准曲线的标准品。由于NanoDrop 2000/2000c能够检测比常规比色皿检测更高的浓度，用户需要使用比厂家推荐的标准品更高的浓度。
检测需要的样品量
虽然检测的样品量不是很关键，但在使用基座检测时要确保形成液柱，这样在上下基座之间形成样品桥。
决定液体表面张力的主要因素时溶液中水分子之间的氢键。通常情况下，水中的物质，如：蛋白，盐离子，去污剂等都会通过破坏水分子之间的氢键来减小表面张力。虽然对于大部分样品来说，1ul的量就足够用于检测了，我们建议在做蛋白检测时由于表面张力下降做好使用2ul的样品来检测以保证形成液柱。
在使用比色皿检测时，要确保液面的高度高于光线通过比色皿的高度，参考比色皿生产厂家的说明来确定需要的液体量。
基座再生
带有表面活性剂的溶液或者试剂会破坏检测基座上液柱的形成。在这种情况下，使用Nanodrop基座再生复合物来快速再说基座表面。关于PR-1的其他信息请参考网页。
独特的屏幕特征
右侧的显示是BCA特有的。左侧的任务栏在“Software Overview”中有详细描述。
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光谱显示口显示当前样品的数据，使用基座检测的结果是标准化到1mm光程下的数据，而使用比色皿检测时是选择的光程下的数据。光程的信息显示在Y轴上。 Data tab－显示当前样品的数据
Standard Curve tab－显示标准曲线，可以显示R2值和标准曲线。标准曲线类型包括多参数方程，线形，多级方程等，默认的选择是线形。
Valid/Invalid Curve－显示是否有最小量的标准品已经被检测了。当满足要求时，标准曲线的状态将从无效的状态（红色）变成有效曲线（绿色）。
注意：这状态仅仅表示检测样品数已经满足标准曲线需要的最少样品点。标准曲线状态不指示标准曲线的拟合情况，要包括一个比较宽的检测浓度范围，需要更多的标准品点。
Sample radio button－当构建的标准曲线满足要求时，样品ID位臵将能够可以选择，在检测样品前应输入样品名称。
Standards radio button－选择上后可以输入标准名称和浓度。 Concentration mg/ml－当前样品的浓度单位。
Absorbance at 562nm－Cu-BCA复合物在562nm处吸光值。
BCA标准曲线
BCA分析时需要标准曲线。
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标准曲线例子：20:1 试剂/样品体积
一个最简单的标准曲线可以有两个点组成，包括两个标准品点或者一个参考点（仅仅有BCA试剂，没有蛋白）和一个标准品点。
最多可包括7个标准品点，检测各个标准品点没有顺序。
标准品点只能在样品检测时添加到标准曲线中，当开始检测第一个样品，就不能向标准曲线中添加标准品点了。
在样品检测前可以随机删除任何一个标准品点。右击结果表格可以删除一个标准品或者删除标准品结果表格。在重复孔数据上点击右键可以删除特定标准品的重复。
在第一个样品开始检测后，删除的标准品不能被添加或者重新检测。
要建立一个新的标准曲线，必须先建立一个新的工作薄。如果把样品添加到以前的工作薄中，可以使用以前构建好的标准曲线。建议在添加数据到工作薄之前要按照试剂生产厂家的说明来构建标准曲线。
注意：如果选择以前保存的工作薄，所有样品的浓度计算都是基于工作薄中的标准曲线进行的。每个工作薄只能保存一个标准曲线。
进行BCA检测
参考试剂生产厂家说明准备样品。
零点参考标准是与其他标准品和样品同样的样品/试剂比例进行操作，只是里面没有蛋白。
按照厂家操作说明准备标准品和样品。使用的空白对照要与标准品，样品的pH值和盐离子浓度一样。
标准品的浓度范围要覆盖全面样品的浓度范围。
操作过程：
1． 从主菜单中选择Protein BCA，如果出现波长确认窗口，确保检测臂放下并点击OK. 2． 在右侧表格中输入每个标准品的浓度，软件可以最多检测7个标准品。参考和标准
品可以检测多个重复。
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Nanodrop 2000中文操作手册
