? Options-让用户或者组能够进入:应用,报告管理页面,参数选择和帐户。 ? Reports-能够让客户或者组能够在报告屏幕下可以进入配臵标签和再生键。 ? Editor-让用户或组能够删除用户编写的方法,保存动力学方法。
? Use Current Settings as default-把当前的应用参数设定卫为默认值。 ? Overwrite files-在已存的工作薄名下保存一个新的工作薄。 ? Allow access to Groups:
? 用户可以进入,添加,删除,修改组。
要进入上面描述的特定的路径:
1. 在左侧突出显示感兴趣的特征,对每个小类的路径都必须分别授权。
2. 使用List names from 和Organization的下拉菜单来选择特定的用户和组。 3. 点击Add把用户或者组移动到中间框中。只有那些在中间框中的名称才能进入左边
栏的突出的软件特征。在默认情况下,对于每个应用用户组都要添加到允许的路径中。
下拉框和列表框:
? List name from-显示可以从中选择的区域列表。
? Organization-显示选择区域中的组织列表。(如果本地区域被选择了,就不选
择这个列表了)
? Allow access to-授权给用户或者组可以使用前面描述的软件参数。
? 要添加一个用户或组到用户或组列表中,在页面底部的Select or enter a
name区域输入一个有效的用户名或组名,再点击Add键。
? 名称必须包括区域名,如果一个名称是有效的,就可以出现再授权列表中。如
果如果命名无效,将会出现一个警告信息提示您。
? User and Groups-一个选择的区域中的有效的用户列表。
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3.应用
总论
使用NanoDrop 2000/2000c分光光度计可以方便的使用微量样品进行紫外-可见分光检测。NanoDrop 2000/2000c可以应用于如下检测:
? 不用稀释可以检测浓度小于15000ng/ul(dsDNA)的核酸浓度和纯度 ? 普通的紫外-可见分光光度检测 ? 纯蛋白浓度检测(A280)
? Micro array和Protein & Labels应用中的荧光染料基团检测 ? 扩展的光谱检测,定量应该标记蛋白,金属蛋白 ? BCA蛋白定量分析 ? Bradford蛋白定量分析 ? Lowry法蛋白定量分析
? Pierce 660nm蛋白定量分析 ? 微生物细胞培养检测 ? 动力学检测
? 用户自己编辑检测方法 快速启动
1. 双击软件图标,并在右栏中选择感兴趣的软件应用。
? 在进行检测签选择Add to report来把样品数据保存到一个工作薄中。 2.使用合适的缓冲液来建立一个空白对照。
? 基座模式:取1-2ul空白液加到底部基座上,放下检测臂并点击Bank。 ? 比色皿模式(仅仅2000c):选择Use Cuvette,按仪器上指示箭头插入比色
皿。检测光束(2mm)位臵在比色皿底部以上8.5mm,参考比色皿生产厂家的建议来确定需要液体体积。
注意:使用比色皿检测时,也需要把检测臂放下。在使用基座检测时,建议把比色皿拿出以保证基座臂能放到合适的位臵。
3.使用干净无尘纸把基座上的空白液擦干净,在合适的位臵输入样品名称,取1ul样
品进行检测。
注意:每次检测的样品都必须是刚加入的。
检测后:
? 使用干净的无尘纸擦掉上下基座上的样品,即可用于下一个样品检测。 ? 当使用比色皿检测时,拿出比色皿,在做下一个样品前清洗干净并凉干。
虽然没有必要在做每个样品之前都做空白对照,但建议在做一种样品检测30min后做一次空白对照。30min后,最后一次做的空白对照的时间会显示在底部状态栏上。
在NanoDrop 2000的用户指南的附件上有一个快速使用指南,其中有空白对照和样品检测的操作说明。建议把这个指南打印出来贴在仪器附近作为参考。
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注意:上面说的染料的检测范围只针对基座检测。
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核酸
总论
使用NanoDrop 2000/2000c可以很方便的检测核酸的浓度和质量。要检测核酸在主页面上选择Nucleic Acid功能。
核酸浓度计算
使用Beer-Lambert定律来进行核酸浓度计算:
C=核酸浓度,单位ng/ml A=AU的吸光值
ε=消光系数,单位ng-cm/ml b=光程,单位cm
通常情况下核酸的消光系数为: ? 双链DNA:50ng-cm/ul ? 单链DNA:33ng-cm/ul ? RNA:40ng-cm/ul
当选择基座模式,NanoDrop 2000/2000c分光光度计使用1.0mm到0.05mm的短光程来进行检测,这样保证不用稀释就可以检测高浓度样品。
注意:报告中的吸光值可以象软件屏中显示的模式存档。不论基座检测还是比色皿检测,核酸检测的吸光值被一致化为1cm光程下的读数值。
NanoDrop 2000/2000c分光光度计可以准确检测≤15000ng/ul的双链DNA而不用稀释。对每个样品,软件会自动选择最佳的检测光程进行检测。参考“Measurement Ranges”来获得详细信息。
当检测样品的吸光值≥3.0时(1cm光程下),可以使用较少量的样品进行检测。
独特的屏幕显示
右侧栏显示核酸检测特定的配臵,左侧的任务栏在“Software Overview”中有详细描述
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光谱图中显示的数据都是一致化为10mm光程下的读数。 光谱显示的右栏包括以下内容:
? Sample ID-输入样品名称,在进行样品检测时应输入样品的名称。
? Type-一个下列菜单来选择检测的核酸类型,选择DNA-50做dsDNA检测,
RNA-40做RNA检测,ssDNA-33做单链DNA检测。其他选择包括,DNA寡核苷酸核RNA寡核苷酸,需要输入相应的吸光系数。可以输入的吸光系数范围时15-150。 ? Conc-通过260nm处的吸光值和消光系数计算得到的浓度值,浓度单位可以在后
面的下拉框中选择。参考“Nucleic Acid Calculations”中的详细信息。 ? A260-显示10mm光程下的260nm处的吸光值。 ? A280-显示10mm光程下的280nm处的吸光值。
? 260/280-260nm和280nm处的吸光值的比值,这个值用来判定DNA和RNA的纯
度。纯DNA的比值在1.8左右,纯RNA的比值在2.0左右。如果这个比值偏小,表明有蛋白,苯酚或者其他污染物存在,这些物质在280nm处有明显的光吸收。 ? 260/230-260nm和230nm处的吸光值的比值,这是一个次要的核酸浓度指示值。
纯核酸的这个比值比260/280比值大,一般在1.8-2.2之间,如果比值偏低,表示核酸中有污染物。
? Baseline correction-如果选择了基线校准,默认的校准波长为340nm。用户可
以根据试验需要输入不同的校准波长。在任何试验下,基线都是自动设定为选择波长下的吸光值。所有波长下的读数都要减去这个值。
注意:如果不选择基线校准,光谱值将会产生偏移,计算的浓度也会改变。
核酸浓度检测
1. 在主菜单中选择核酸模式,如果显示波长校准窗口,放下基座臂点击OK。 2. 选择检测的样品类型,默认的设定为DNA-50。 3. 选择浓度单位,默认的为ng/ul。 4. 默认的校准波长为340nm,重新选择一个校准波长或者去选择Baseline来不选择校
准波长。
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