做空白对照。
一个最简单的标准曲线可以有两个点组成，包括两个标准品点或者一个参考点（仅仅有Pierce试剂，没有蛋白）和一个标准品点。
最多可包括7个标准品点，检测各个标准品点没有顺序。
标准品点只能在样品检测时添加到标准曲线中，当开始检测第一个样品，就不能向标准曲线中添加标准品点了。
在样品检测前可以随机删除任何一个标准品点。右击结果表格可以删除一个标准品或者删除标准品结果表格。在重复孔数据上点击右键可以删除特定标准品的重复。
在第一个样品开始检测后，删除的标准品不能被添加或者重新检测。
要建立一个新的标准曲线，必须先建立一个新的工作薄。如果把样品添加到以前的工作薄中，可以使用以前构建好的标准曲线。建议在添加数据到工作薄之前要按照试剂生产厂家的说明来构建标准曲线。
注意：如果选择以前保存的工作薄，所有样品的浓度计算都是基于工作薄中的标准曲线进行的。每个工作薄只能保存一个标准曲线。
进行蛋白Pierce 660nm检测
参考试剂生产厂家说明准备样品。
零点参考标准是与其他标准品和样品同样的样品/试剂比例进行操作，只是里面没有蛋白。
按照厂家操作说明准备标准品和样品。使用的空白对照要与标准品，样品的pH值和盐离子浓度一样。
标准品的浓度范围要覆盖全面样品的浓度范围。
操作过程：
1． 从主菜单中选择Protein Pierce 660nm，如果出现波长确认窗口，确保检测臂放下
并点击OK.
2． 在右侧表格中输入每个标准品的浓度，软件可以最多检测7个标准品。参考和标准
品可以检测多个重复。
注意：标准曲线最少需要2个标准品点或者一个0参考点和一个标准品点。推荐检测多个标准品，标准品的浓度范围要覆盖样品的浓度范围。
3． 选择Add to report把检测的结果自动保存到当前报告中去。默认的设定是把所有样
品添加到报告中。要把样品结果保存到工作薄中，必须在检测样品前把Add to report选上。
? 选择文件下拉选择中的Use current settings as default来节约每个新的工作薄
的设定时间。
4． 选择Overlay spectra来同时显示多个光谱图。
5． 使用合适的缓冲液做空白对照。通常使用纯水做为空白对照。
a) 基座模式：取1－2ul纯水加到基座上，放下检测臂并点击Blank。
b) 比色皿模式（仅2000c）：按照比色皿生产厂家的建议加入适量的空白溶液，
按照仪器上标记的光路放心，插入比色皿。
注意：用任何模式检测时检测臂都必须放下，在用基座检测时，建议把比色皿从仪器上取出，以保证检测臂放到合适的位臵。
45
6． 在标准品标签下，选择一个标准品，按上面做空白一样加样，点击Measure开始检
测，要在所有标准品检测完成后再做样品检测。 7． 在标准品检测完成后，点击Sample按键，输入样品名称，加2ul样品到检测基座上，
点击Measure开始检测样品。在检测标准品和样品之间不需要再做空白对照。 注意：每次检测的样品必须是新鲜加入的！
检测完成以后：
? 用干净的无尘纸擦拭干净上下基座，这样仪器就可以进行下一个样品的检测了。 ? 当使用比色皿模式时，取出比色皿，彻底清洗干净然后再进行下一个样品检测。
Cell Cultures
总论
使用分光光度计来检测细胞悬液的光散射在生物学实验室是非常常用的。而这个功能相对于其他分光光度计的应用，不同厂家在仪器设计上体现了更大的不同。
对于NanoDrop 2000/2000c而言，基座检测和比色皿检测之间最大的不同是光程不一样（1mm vs 1cm），使用基座检测的数据会是比色皿检测的数据的1/10。 细胞培养检测功能显示从250nm到700nm范围内的光谱结果。
检测需要的样品量
虽然检测的样品量不是很关键，但在使用基座检测时要确保形成液柱，这样在上下基座之间形成样品桥。
决定液体表面张力的主要因素时溶液中水分子之间的氢键。通常情况下，水中的物质，如：蛋白，盐离子，去污剂等都会通过破坏水分子之间的氢键来减小表面张力。虽然对于大部分样品来说，1ul的量就足够用于检测了，我们建议在做蛋白检测时由于表面张力下降做好使用2ul的样品来检测以保证形成液柱。
在使用比色皿检测时，要确保液面的高度高于光线通过比色皿的高度，参考比色皿生产厂家的说明来确定需要的液体量。
样品均一性
在检测前要确保样品的均一性，使用基座检测前要把样品混合均一在加到基座上检测，使用比色皿检测时可以使用震荡功能。
检测范围
由于采用了比较短的检测光程，NanoDrop 2000/2000c可以之间检测比较高浓度的细胞悬液。由于可以显示全光谱。比较稀的样品可以在较低的波长下检测，比如说可以在400nm处检测。用户还可以使用比色皿来检测比较稀的样品。
检测基座的消毒
如果需要消毒，使用消毒液，如可以使用0.5%的次氯酸钠来清洁基座，以保证基座上没有生物活性物质残留。
注意：不要使用喷壶来对着仪器喷消毒液，可以使用消毒液来湿润无尘纸来擦拭仪器
46
上下基座和仪器外部，在用无尘纸沾纯水来清洁仪器，最后用干纸擦干净仪器。
独特的屏幕特征
右侧的显示是Cell Cultures特有的。左侧的任务栏在“Software Overview”中有详细描述。
如果用基座检测，光谱显示了校准到1mm光程下的样品的数据，如果使用比色皿检测，显示选择光程下的数据。光程信息显示在Y轴上。
Abosrance correction－用户可以自定义基线值，基线可以通过选择指针然后上下移动来调整，也可以通过输入数据来调整。
600nm（Abs）－使用用户定义的基线，600nm处的吸光值。
User cursor（nm）－用户定义的光标位臵。用户可以移动光标的位臵，也可以输入特定波长来改变光标位臵。
User cursor（Abs）－在用户定义的基线下，用户定义波长下的吸光值。
进行细胞浓度检测：
1． 从主菜单中选择Cell Cultures，如果出现波长确认窗口，确保检测臂放下并点击
OK.
2． 选择Add to report把检测的结果自动保存到当前报告中去。默认的设定是把所有样
品添加到报告中。要把样品结果保存到工作薄中，必须在检测样品前把Add to report选上。
3． 选择Overlay spectra来同时显示多个光谱图。
4． 使用合适的缓冲液做空白对照。通常使用纯水做为空白对照。
a) 基座模式：取2ul空白对照加到基座上，放下检测臂并点击Blank。
b) 比色皿模式（仅2000c）：按照比色皿生产厂家的建议加入适量的空白溶液，
按照仪器上标记的光路放心，插入比色皿。
47
注意：用任何模式检测时检测臂都必须放下，在用基座检测时，建议把比色皿从仪器上取出，以保证检测臂放到合适的位臵。 5． 在标准品检测完成后，点击Sample按键，输入样品名称，加2ul样品到检测基座上，
点击Measure开始检测样品。在检测标准品和样品之间不需要再做空白对照。 注意：每次检测的样品必须是新鲜加入的！
检测完成以后：
? 用干净的无尘纸擦拭干净上下基座，这样仪器就可以进行下一个样品的检测了。 ? 当使用比色皿模式时，取出比色皿，彻底清洗干净然后再进行下一个样品检测。
48
Nanodrop 2000中文操作手册
