鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒活性测定
陈红英;宋凌云;崔保安;胡功政;贾艳艳;郭显坡
【摘 要】通过PCR技术从罗曼鸡肝脏基因组中扩增鸡α干扰素(ChIFN-α)全基因,并克隆和测序.序列分析表明,ChIFN-α基因全长为582 bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因489 bp,利用基因重组技术构建了重组质粒,使ChIFN-α置于原核表达载体pQE30的T5启动子下并同6×His(多聚组氨酸标签)-Tag 融合.经酶切和PCR鉴定,DNA测序证实重组质粒pQEChIFN-α构建正确;将pQEChIFN-α转化大肠杆菌M15感受态细胞,用IPTG诱导表达.SDS-PAGE和Western blot证实表达出分子质量为19.80 kDa的融合蛋白.表达的蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性处理后,在Vero细胞上抗水泡性口炎病毒的活性为1.16×103 U/mg.本研究成功表达了ChIFN-α,表达的重组蛋白具有一定的生物活性. 【期刊名称】《华北农学报》 【年(卷),期】2009(024)001 【总页数】4页(P40-43)
【关键词】鸡;α干扰素;克隆;原核表达;抗病毒活性 【作 者】陈红英;宋凌云;崔保安;胡功政;贾艳艳;郭显坡
【作者单位】河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南省动物性食品安全重点实验室,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南省动物性食品安全重点实验室,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南省动物性食品安全重点实验室,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南省动物性食品安全重点实验室,河南,郑
州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002;河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002 【正文语种】中 文 【中图分类】农业科学
ACTllORICULTUIIAEDOREIILI-SIHICll 华北 农 学报 ． 2009 ，24(1) ：40-43鸡 cc 干 扰 素 基 因 的 克 隆 、 原 核 表 达 及 抗 病 毒 活 性 测 定陈红 英1,2 ， 宋凌云 1,2 ，崔保 安1,2 ， 胡 功政 1,2， 贾艳 艳 1， 郭 显 坡 （ 1 ． 河南农业大学 牧医．_[程学院，河南 郑州 450002 ；
2 ． 河南省动物性食品安全重点实验室 ，河南 郑州 450002 ）摘要 ：通过 PCR 技术从罗曼鸡肝脏基 因组 中扩增鸡 a 干扰 素（ Ch.IFN-a ） 全 基 因 ， 并克隆和测 序 。 序列 分析表 明 ， ChIFN-a 基 因全长为 582bp．亚 克隆其成熟蛋 白编码基 因 489bp，利用基 因重组技术构建了重组质粒 ，使 ChIFN-a 置 于原核表达载体 pQE30 的 T5 启动子下 并同 6 × His(多聚组 氨 酸标 签 )-Tag 融 合 ， 经 酶切 和 PCR 鉴 定 ，DNA 测 序证 实 重 组质粒 pQEChIFN-a 构建正 确 ； 将 pQEChIFN-a 转 化大肠杆菌 M15 感受态细胞 ，用 Ⅱ yrc 诱导表达 。 SDS-PACE 和 Westernblot 证实表达 出分子质量 为 19.80kDa 的融合蛋 白。 表达 的蛋 白以包涵体形式存在 ，经变性 、复性处理后 ，在 Vero 细胞 上抗水泡性 口 炎病毒的活性 为 1.16 × l03U/mg 。 本研究成功表达 了 ChIFN-a ， 表达 的重组 蛋 白具有一定 的生物活性 。 关键词 ：鸡 ； a 干扰索 ；克隆 ；原核表达 ； 抗病毒活性中图分类号 ：Q785文献标识码 ：A文章编号 ：1000-7091(2009)01-0040-04 Cloning,Prokaryotic Expression and AntiviralActivity ofChicken Interferon-cr,Gene CHENHong-ying\
an''2,HUGong-zheng1· 2,IA Yan-yan'.GUO Xian-pol (I.Collegeof
AnimalHusbandryandVeterinary,HenanAgriculturalUniversity,Zhengzhc,u 450002, China;2.Animal Food Safety KeyLaboratoryof
HenanProvince,Zhenp;zhou 450002,China) Abstract:The fulllengthof chickeninterferon alpha(ChIFN-a)genewasarnplif'iedbyp()1ymerasechainreLuttion (PCR)fromthe genomeDNAof
Luomanchickenliver,andthensequenced.Theamplifiedgenefragmentwas582l,p,ofwhichthe489bpcodingregionwassubclonedintoprokaryoticexpressionvecitc)r1)QE30.Therec:ombinantplasmidpQEChIFN-awasidentifiedbyPCR,enzymedigestion andDNAsequencing.SDS-PACEandWestemblot showedthat a19.80 kDa fusion proteinwasexpressedin the formof inclusicmbodywithgoocl imrnunity.Afterbeingdenaturedancl re- natured,theactivity of
inclusionbodywasdetectedbyinhibiting Lhe cytopathiceffbc-t.The activity c,frecombinantChIFN- a againstvesicular stomatitis virusatVerocell is l.16 xl03 U/mg. Key words:Chicken;IFN-a;Clone;Prokaryotic expression; Antiviral ac:tivity干扰素( Interferon ，IFN) 是 由脊椎 动物 细 胞 产 生 的一类分泌 型 多功 能糖 蛋 白， 是 一 种 具 有广 谱抗病 毒 、抗肿瘤和增 强 免疫 功 能 的细胞 因子 。 干 扰 素分 为I型 和 n 型 两类 。 I 型 干扰 素包括 IFN-a 和 IFN-B 等 ， Ⅱ型 干 扰 素 又 称 免疫 干 扰 素 即 IFN-y 。 a 干 扰 素是 由能在脊椎动物各种类 型 细胞增殖 的病毒诱导 白细胞产生 的…，其 主 要 活性 是 抗 病 毒 。 鸡 Q 干 扰素（ Chickeninterferon-alpha，ChIFN-a ） 全基 因为 582 个碱基 ， 编码 193 个 氨基 酸 ， 其 中前 31 个 氨基 酸 为信 号肽 ，后 162 个氨基酸 为成熟蛋
鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒活性测定
