SHIP2在非小细胞肺癌中的表达及意义
张鉴 袁崎 傅茂英
【摘 要】【摘要】 目的 研究SHIP2在非小细胞肺癌中的表达,探讨其表达与非小细胞肺癌预后之间的关系。方法 应用qPCR和免疫组织化学方法(IHC)分析SHIP2在非小细胞肺癌中的表达。使用Kaplan-Meier统计方法和Cox比例风险回归模型来进行生存分析，评估100例非小细胞肺癌患者的预后。结果 SHIP2在非小细胞肺癌的表达明显高于非肿瘤组织(P<0.05)。SHIP2的表达与淋巴结转移(P=0.042),TNM阶段(P=0.036),5年生存率(P=0.046)有关。Kaplan-Meier统计方法和时序检验分析进一步表明SHIP2高表达、吸烟、晚期肿瘤和预后不良显著相关。结论 SHIP2表达和非小细胞肺癌的恶性表型相关，可以作为非小细胞肺癌独立预后因素和重要致癌基因。 【期刊名称】河北医药 【年(卷),期】2016(038)014 【总页数】4
【关键词】【关键词】 SHIP2；非小细胞肺癌；聚合酶链式反应；免疫组织化学；预后
【文献来源】
journal_thesis/0201247273636.html
https://www.zhangqiaokeyan.com/academic-journal-cn_hebei-medical-
·论著·
肺癌是全球常见、致命的恶性肿瘤[1,2]。在我国, 过去的三十年肺癌的病死率增加了400%,是第二大死因[3]。肺癌包括小细胞肺癌(SC)和非小细胞肺癌(NSCLC)，后者约占85%。早期NSCLC患者术后的长期生存率较高。然而,大
多数的NSCLC患者(占80%)诊断时已经处于晚期。尽管NSCLC诊断和治疗技术不断改善,但患者的预后仍然很差,5年生存率仍然较低(15%)[4,5]。目前,研究人员正在关注与NSCLC预后相关的标志物[6,7]。寻找与预后因素相关的重要基因，以期能够增加潜在治疗靶点的选择和对NSCLC的治疗。SHIP2被认为下调磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信号,导致了多种人类癌症的进展[8-10]。最近的两项研究表明,SHIP2有致瘤的特征, SHIP2高表达与乳腺癌预后和喉鳞状细胞癌相关(LSCC)[11,12]。这些发现表明,在肿瘤发生中SHIP2扮演关键角色。因此,SHIP2可能是人类癌症候选生物标志物，对预后有着预测作用。然而, NSCLC SHIP2的表达与临床病理的相关性的实质性的作用机制尚未阐明。本研究中，我们选择SHIP2作为研究对象，运用qPCR和免疫组织化学方法(IHC)检测NSCLC中SHIP2含量及相应表达情况，并根据组织芯片(TMA)建立的非小细胞肺癌患者数据库，分析SHIP2与NSCLC临床病理学特征及预后的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 100例甲醛固定,石蜡包埋的NSCLC肿瘤(其中肺腺癌45%,肺鳞癌55%)标本来源于2005至2006年我院患者。患者年龄35～81岁，平均年龄(手术时)(60.4±2.8)岁。收集相关的临床数据,包括性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型、吸烟状况、肿瘤分化,TNM阶段,淋巴结转移,5年随访生存。患者术前均未接受放疗、化疗、或免疫疗法。16例新鲜冷冻NSCLC肿瘤标本(8例腺癌和8例鳞癌)和相邻瘤旁组织样本来源于我院。
1.2 qPCR检测分析 采用Trizol试剂(Life Technologies公司, 格兰德艾兰, 纽约)从16例新鲜NSCLC组织以及相应的癌旁组织中细胞中提取总RNA，根据产品使用说明书进行qPCR检测分析。SHIP2的引物如下:正向引物5’-
TCGTCACCAGCGACCATT C-3’;反向引物5’-
AGCCCTTTCTTGGAGATGAACTG-3’。内参GAPDH引物如下:正向引物5’-TGCACCACCAACTGCTTAGC-3’GGCATGGACTGTGGTCATGAG-5’。
1.3 组织芯片制作 TMA由上海芯超生物公司定制。TMA被切成4 μm大小，使用多克隆山羊抗SHIP2抗体(Santa Cruz Biotechnology公司,圣克鲁斯,加州,美国)在全自动免疫组化染色系统(LabVision公司,卡拉马祖，密歇根州，美国)下分别染色。二抗使用山羊抗辣根过氧化物酶HRP抗体(Dako Cytomation公司，卡平特里亚，加州，美国)。IHC结果分析按照既往IHC分析方法进行分析[13,14]。SHIP2免疫组化染色评分(HIS)由2个独立的病理学专家根据染色强度和SHIP2阳性细胞的百分比得出。每个切片随机选择4个视野,使用免疫组织化学评分(IHS)方法来评估阳性染色百分比。IHS通过评估染色密度和强度分析结果，染色强度评分：0(阴性)，1(弱阳性)，2(阳性)，3(强阳性)。SHIP2阳性细胞百分率也根据以下评分分为四类：1代表0～10%，2代表11%～50%，3代表51%～80%，4代表81%～100%。两者分数之和得出最终的HIS分值：总分低于3的样本(IHS≤3)被认为是SHIP2低表达，为阴性表达。而以总分4以上(IHS≥4)为SHIP2高表达，为阳性表达。
1.4 统计学分析 应用STATA 12.0统计软件，新鲜NSCLC组织与癌旁正常组织SHIP2 mRNA表达比较应用Wilcoxon符号秩检验进行分析。计数资料采用χ2检验，对预后重要因素进行单变量和多变量分析。SHIP2表达与NSCLC患者预后之间关系使用Kaplan-Meier统计方法进行生存分析，P<0.05为差异有统计学意义。
，反向引物3’-
SHIP2在非小细胞肺癌中的表达及意义
