山东科源制药有限公司
Shandong Keyuan Pharmaceutical Co., Ltd 标题 Title 洁净室（区）沉降菌监测操作规程 部门：质量管理部 Dept. 部门：质量管理部 Dept. 部门：分管副总 Dept. 起草人： 日期： Written by Date 审核人: 日期： Reviewed by Date 批准人: 日期： Approved by Date 分发部门：质量管理部 Distribution 文件编号：SOP-ZL-006 Document No. Page 1 of 7 生效日期： Effective Date 替代版本：04 Replaced Version 版 本 号：05 Version No. 1 目的
确定医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法和标准。
2 范围
适用于不同洁净室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境验证。
3 责任
QC微生物室负责洁净室（区）沉降菌的监测。
4 内容
4.1 参考标准
中华人民共和国国家标准GB/T16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》。
中华人民共和国卫生部发布的《药品生产质量管理规范（2010年修订）》。 4.2 监测程序 4.2.1 设备
高压消毒锅 恒温培养箱
培养皿：一般采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。 4.2.2 培养基及平皿制备
4.2.2.1 一般采用普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基 4.2.2.2 制备过程如下：
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将培养皿与用三角瓶装好的培养基在高压消毒锅内121℃湿热灭菌20
分钟或180℃干热灭菌2小时；
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Shandong Keyuan Pharmaceutical Co., Ltd 标题 Title 洁净室（区）沉降菌监测操作规程 部门：质量管理部 Dept. 部门：质量管理部 Dept. 部门：分管副总 Dept. 起草人： 日期： Written by Date 审核人: 日期： Reviewed by Date 批准人: 日期： Approved by Date 分发部门：质量管理部 Distribution ? ? ?
养皿，每皿约15ml。
文件编号：SOP-ZL-006 Document No. Page 2 of 7 生效日期： Effective Date 替代版本：04 Replaced Version 版 本 号：05 Version No. 将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培 待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30－35℃恒温培养箱中培养48 制备好的培养基平皿倒置在2－8℃的环境中存放，注意避免污染。
小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
4.2.3 采样点和监测频次
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Shandong Keyuan Pharmaceutical Co., Ltd 标题Title 洁净室（区）沉降菌监测操作规程 文件编号：S0P-ZL-006 Document No. 版本号Version No.：05 Page 3 of 10 4.2.3.1 采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目（附件），在满足最少采样点数的同时，还宜满足最少培养皿数和采样点布置（附件）。
4.2.3.2 工作区采样点的位置离地0.8米－1.5米左右（略高于工作面）。并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
4.2.3.3 监测频次：每月一次，特殊情况及时监测。 4.2.4 测试规则
4.2.4.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。 4.2.4.2 测试前被测试洁净室（区）已经过消毒。 4.2.4.3 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。 4.2.4.4 测试时间：
? 对单向流（如A级净化房间及层流工作台），测试应在净化空调系统正常运 行不少于10分钟后开始。
? 对非单向流，如B级、C级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运 行不少于30分钟后开始。 4.3 测试步骤 4.3.1 采样
将已制备好的培养皿按要求放置，使培养基表面暴露0.5小时。 4.3.2 培养
全部采样结束后将培养皿倒置于恒温培养箱中，在30～35℃培养，时间不少于48小时。每批培养基应有对照试验，每批可选定3只培养皿作对照培养。 4.3.3 菌落计数
用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，并用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。 4.3.4 注意事项
测试时应注意如下事项：
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防止人为对样本的污染。
文件编号：S0P-ZL-006 Document No. 版本号Version No.：05 Page 4 of 10 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，应注意培养皿边缘生长的菌 采样时应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔
落，并注意菌落与培养基沉淀物的区别。 除。
4.3.5 结果计算
用计数方法得出各个培养皿的菌落数，按下式计算： 平均菌落数M＝M1＋M2＋------Mn／n 式中：M1＝1号培养皿菌落数
M2＝2号培养皿菌落数 Mn＝n号培养皿菌落数 n＝培养皿总数 4.3.6 结果评定 4.3.6.1
沉降菌最大允许值（菌数/皿） 洁净度级别 静 态 A级 C级 D级 ≤1 ≤3 ≤10 4.3.6.2 用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。
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洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。
若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区预先进
行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
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Shandong Keyuan Pharmaceutical Co., Ltd 标题Title 洁净室（区）沉降菌监测操作规程 文件编号：S0P-ZL-006 Document No. 版本号Version No.：05 Page 5 of 10 4.3.7 警戒限度和纠偏限度
沉降菌警戒限度（菌数/皿） 洁净度级别 动 态 A级 C级 D级 沉降菌纠偏限度（菌数/皿） 洁净度级别 动 态 A级 C级 D级 4.3.8 异常情况的处理
4.3.8.1 当连续三次样品测试结果超过警戒标准或单个样品的结果特别高时调查原因，必要时采取相应纠偏措施。
4.3.8.2 当空调系统维修（如更换高效过滤器）或停用超过30天时，重新启用空调系统后应及时对洁净室（区）进行环境监测。
＜1 ≤2.5 ≤8 ＜1 ≤2 ≤5 5 修订记录
版本号 —— 01 主要变更内容描述 新建文件 增加文件版号 变更原因 生效日期 备注 —— 2004.03.01 文件版本升级 2006.01.01 保密文件
006 洁净室(区)沉降菌的测规程
