2013-2014年度第二学期基因工程期末考试
卷型：A考试时间：90分钟 满分：100分
一、 名词解释（3X 5）
限制性内切酶（或其它工具酶）：能在特异位点上催化双联 DNA分子断裂，产生相 应的限制性DNA片段
荧光定量PCR所谓实时荧光定量 PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用 荧光
信号积累实时监测整个 PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法
（半定量PCR是近年来常用的一种简捷、特异的定量
RNA测定方法，通过mRNA反转录成
mRNA勺相对数量）
cDNA再进行PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异
星活性：非标准条件下切割相似序列，产生非特异性片段 同裂酶（或同尾酶）：来源不同但具有相同识别序列，产生相同或不同末端 转基因技术（或转基因动植物等）就是将人工分离和修饰过的基因导入到目的生 物体的基因组中，从而达到改造生物的目的。
二、 填空（1 X 15）
1. Cosmid实际上是由cos位点和质粒构成的杂合载体,也可以说是带有cos序 列的质粒。
2. 超螺旋质粒DNA开环质粒DNA线状质粒DNA在琼脂糖凝胶电泳的特点是： 电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒 ＞线状质粒 ＞开环质粒。 3. 质粒DNA的提取方法有碱裂解法、煮沸法、去污法 。 4. 基因工程中常用载体是质粒、 噬菌体、 动植物病毒。 5. 设计引物是一般要求 C+G的比例在40%-60%,长度在17-30bp 6. BAC载体与常规载体的区别在于复制单元的特殊性 三、 选择题（2X 15,实卷应是1.
。
。
1X 35）
基因工程创始人（D）
A A. Kornberg B W. Gilbert C P. Berg D S. Cohen
2. 迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（
A. 既可以作用于双链 DNA，又可以作用于单链 DNA B. C. D. 3.
只能作用于单链DNA 只能作用于双链DNA 只能作用于RNA
C）
氨苄青霉素的工作原理为（A ） A. 可以抑制细胞壁肽聚糖的合成 B.可以抑制核糖体的转位
C. 可以与核糖体50S亚基结合并抑制蛋白质合成 D. 可以与核糖体30S亚基结合并抑制蛋白质合成
4. 反转录酶是一种（C ）
A.
RNA聚合酶
C.依赖RNA的 DNA聚合酶 5.11类限制性内切核酸酶（A ）
依赖DNA的 DNA聚合酶 B. 依赖DNA的 D.
依赖RNA的 RNA聚合酶
A. 仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 B. 限制性识别非甲基化的核苷酸序列 C. 有外切核酸酶和甲基化酶活性
D. 仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
6. 下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是 II类酶的识别序列（C） A. GAATCG B.AACCTT C. GATATC D.ACGGCA
7. （多选）在基因工程中，可用碱性磷酸酶（AB ）。 A.止DNA的自身环化
B?同多核苷酸激酶一起进行 DNA的5'端标记 C?制备突出的3'端 D. 上述说法都正确
8. K1enow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了（ C ）的活性。 A. 5'— 3'合成酶 B . 3'— 5'外切酶 C. 5'— 3'外切酶 D .转移酶
9. 自然界中存在的植物植物基因工程载体是（D） A.YAC B.根癌农杆菌C. Puc18 D.Ti 质粒
10. 质粒具备下列特征，因此适合作为克隆载体，除了 （B）。 A. 赋予宿主细胞某种可检测的特性
B. 甲基化防止宿主的限制性内切核酸酶对其降解 C?独立复制的能力
D. 可复制自身DNA以及插入的外源DNA
11. 用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为（C）A. 染色体DNA断成了碎片
B. 染色体DNA分子质量大，而不能释放 C. 染色体变性后来不及复性 D. 染色体未同蛋白质分开而沉淀
12. DNA提取过程中，异戊醇的作用是（D）。 A.使蛋白质脱水 B .使DNA兑水
C?帮助DNA进入水相D .减少气泡，促进分相
13. PCR反应的必备条件是（B） o
A.至少有100个起始DNA分子B .拟扩增的目的DNA片段的部分序列信息 C. 扩增需要cDNA模板 D.至少100kb长度的模板 14?你打算扩增下面所示的两段序列之间的 DNA
。5' -GACCTGTGGAAGC-------------------- CATACGGGATTG-3 ' 3 ' -CTGGACACCTTCG ---------------------- GTATGCCCTAAC-5 '最适合的弓I物序列 是（B ） o
A. 弓I物 1，5' -CTGGACACCTTCG^ 2，5' -GTATGCCCTAAC B. 引物 1，5' -GACCTGTGGAAGI（物 2，5' -CAATCCCGTATG C. 弓I物 1, 5' -CGAAGGTGTCC引（物 2, 5' -GTTAGGGCATAC D. 弓I物 1, 5' -GCTTCCACAGGTC物 2, 5' -CATACGGGATTG
15、Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段，而Northern印迹则是（C ）。 A.用RNA探针检测DNA片段 B .用RNA探针检测RNA片段 C?用DNA探针检测RNA片段 D .用DNA探针检测蛋白质片段
四、简答题（5题X 6） 1、 基因工程的操作步骤是什么？制备目的基因方法有哪些？（或 CTAB SDS原 理？）答：1.获取目的基因2.从大肠杆菌中分离质粒 3.酶切目的基因与质粒 4. DNA连接酶连接目的基因与质粒 5.导入受体细胞表达6.筛选与鉴定
获取目的基因方法：（1）以氨基酸序列为基础的功能克隆法（2）以核苷酸序列 为基础的同源序列克隆法（3）基因组DNA文库（4） cDNA文库（5）图位克隆法 （6）转座子标签法（7） T-DNAB入法（8） mRNA!异显示法（9）化学合成法 （10）直接分离法（11） PCF分离法
2、 何为载体？ 一个理想的载体应具备那些特点？
答：将外源DNA或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备： ①在宿主细胞内必须能够自主复制（具备复制原点）；②必须具备合适的酶切位 点，供外源DNA片段插入，同时不影响其复制；③有一定的选择标记，用于筛 选；④其它：有一定的拷贝数，便于制备。⑤遗传稳定 3、 影响限制性内切酶的活性因素？
答：①DNA的纯度②DNA甲基化程度③DNA勺分子结构④限制性核酸内切酶的缓 冲液⑤酶切消化反应的时间和温度⑥反应体积和甘油浓度
4、 简述cDNA文库的构建过程。
答：⑴细胞总RNA的提取和mRNA勺分离
⑵第一链合成：由mRNA^ cDNA的过程为反转录，由反转录酶催化。
⑶第二链合成：①自身引物合成法②置换合成法③引导合成法④引物一衔接头合 成法
⑷双链cDNA里连接到质粒或噬菌体载体并导入大肠杆菌中繁殖
5、 常用的工具酶有哪些？其主要用途是什么？（备选）
答：限制性内切核酸酶，DNA聚合酶和Klenow大片段,DNA连接酶， 碱性磷酸酶，末端脱氧核苷酸转移酶?
限制性内切核酸酶： 能够识别特异的DNA碱基序列，DNA碱基序列往往呈回 文对称结构；
武生院基因工程期末试题
