欧阳化创编 2021..02.12
CCK8检测细胞增殖/毒性的原理、方法及注意事项
时间：2021.02.12 创作人：欧阳化 一、CCK8检测细胞增殖/毒性的原理
Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测
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定、肿瘤药敏试验 CCK8的优点：
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使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；
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CCK-8法能快速检测；
CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；
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CCK-8法的重复性优于MTT 法； CCK-8法对细胞毒性小；
CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。
CCK8的缺点：
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与MTT法相比，CCK8和XTT的价格比较贵。 CCK8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加。
与以往的增殖/毒性测定试剂相比较：
检测方法 MTT法 XTT法 WST-1法 好 CCK8法 好 甲臢产物的水差（需加好 溶性 有机溶剂溶解） 产品性状 使用方法 检测灵敏度 粉末 2瓶溶液 溶液 1瓶溶液 配成溶液现配现用 即开即用 即开即用 后使用 高 很高 很高 高 欧阳化创编 2021..02.12
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检测时间 检测波长 细胞毒性 较长 较短 较短 最短 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm 高，细胞很低，细很低，细很低，细形态完全胞形态不胞形态不胞形态不消失 变 变 变 一般 较差 一般 很好 试剂稳定性 批量样品检测 可以 便捷程度 一般 非常适合 非常适合 非常适合 便捷 便捷 非常便捷 二、CCK8检测细胞增殖/毒性的方法 实
验
一
：
细
胞
增
殖
分
析
1、制备细胞悬液：细胞计数
2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
3、37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。 4、加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。或者直接配置含10ìK8的培养基
，
以
换
液
的
形
式
加
入
。
5、培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。
6、测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测
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