圣才电子书www.100xuexi.com十万种考研考证电子书、题库视频学习平台朱玉贤《现代分子生物学》第4版【教材精讲＋考研真题解析】第5章分子生物学研究法（上）——DNA、RNA及蛋白质操作技术[视频讲解]5.1本章要点详解本章要点■DNA基本操作技术■RNA基本操作技术■基因克隆技术■蛋白质与蛋白质组学技术重难点导学（1）基因操作1/20圣才电子书www.100xuexi.com十万种考研考证电子书、题库视频学习平台基因操作包括DNA分子的切割与连接、核酸分子杂交、凝胶电泳、细胞转化、核酸序列分析以及基因的人工合成、定点突变和PCR扩增等，是分子生物学研究的核心技术。（2）基因工程在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其他载体分子，构成遗传物质的新组合，使之进入新的宿主细胞内并获得持续稳定增殖能力和表达。一、重组DNA技术回顾1．分子生物学的三大成就①基因的分子载体是DNA而不是蛋白质。②提出了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制。③提出了“中心法则”和操纵子学说。2．重组DNA技术的发展①DNA分子体外切割与连接技术及核苷酸序列分析技术的进步直接推动了重组DNA技术的产生与发展。②工具酶的发现和应用是现代生物工程技术史上最重要的事件。3．重组DNA技术的内容（1）限制性内切酶几种限制性内切酶的的识别序列及其酶切末端如图5-1所示。2/20圣才电子书十万种考研考证电子书、题库视频学习平台www.100xuexi.com图5-1几种限制性内切酶的的识别序列及其酶切末端（2）载体①定义具备自主复制能力的DNA分子称为分子克隆的载体。②重组载体的构建过程（图5-2）3/20圣才电子书www.100xuexi.com十万种考研考证电子书、题库视频学习平台4/20圣才电子书www.100xuexi.com十万种考研考证电子书、题库视频学习平台图5-2重组载体的构建过程③蓝白斑筛选实验a．lacZ编码β-半乳糖苷酶。b．IPTG诱导lacZ表达。c．β-半乳糖苷酶水解X-gal底物，产生蓝色的溴氯吲哚。④大肠杆菌大肠杆菌细胞经适量氯化钙处理后，能有效地吸收入噬菌体DNA。大肠杆菌是分子克隆中最常用的转化受体。二、DNA基本操作技术1．核酸凝胶电泳技术按相对分子质量大小分离DNA的凝胶电泳技术，已经发展成为一种分析鉴定重组DNA分子及蛋白质与核酸相互作用的重要实验手段。（1）相关概念电泳的迁移率是指电泳分子在电场作用下的迁移速度，其与电场强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比，与分子的摩擦系数成反比。（2）原理根据分子大小的不同、构型或形状的差异以及所带的净电荷的多寡，便可以通过电泳将蛋白质或核酸分子混合物中的各种成分彼此分离开来。（3）分离DNA片段的机制DNA和RNA多核苷酸链又被称为多聚阴离子。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此能以同样的速度向正电极方向迁移。在5/20
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