参贞合剂对S180荷瘤小鼠T细胞免疫功能的
阻碍
【摘要】 目的 研究参贞（人参、黄芪、女贞子）合剂对S180荷瘤小鼠T淋巴细胞免疫功能的调剂作用。方式 小鼠胃饲参贞合剂，流式细胞术检测荷瘤小鼠T细胞亚群转变，MTT法检测荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖能力，ELISA法检测IL
2诱生量。结果 胃饲参贞合剂
2产生量均有明显提
使荷瘤小鼠的T淋巴细胞亚群、增殖能力和IL
高(P＜。结论 参贞合剂对荷瘤小鼠免疫功能有正向调剂作用，将其研制成提高肿瘤患者免疫功能的药物具有良好的前景。
【关键词】 参贞合剂；荷瘤小鼠；免疫调剂
参贞合剂由中药人参、黄芪、女贞子三味中药组成，研究说明人参、黄芪与女贞子都可提高机体的免疫功能，并具有抗肿瘤作用〔1，2〕。为探讨上述3种药合用对荷瘤小鼠免疫功能的阻碍，笔者观看了参贞合剂对荷瘤小鼠T淋巴细胞免疫功能的调剂作用，为进一步开发利用参贞合剂提供实验基础，也为中药医治肿瘤的临床应用提供新的思路。
1 材料与方式
材料
刀豆蛋白A（ConA,Sigma公司)、IMDM培育基(GiBco公司)、标准胎牛血清（中国医学科学院灏洋生物)、淋巴细胞分离液(上海恒信化学试剂)、噻唑蓝(MTT，AMRESCO公司)、ELISA试剂盒（R＆D公司）、单克隆抗体 CD3,CD4，CD8 试剂盒(华丽生物公司)。参贞合剂由本实验室配制。实验动物为昆明种雄性小鼠，体重18～20 g，购自长春高新医学动物实验研究中心。
方式
小鼠随机分成2组，每组10只。腹腔接种S180瘤细胞，于接种同时参贞合剂组以参贞合剂胃饲（按53 g/kg），生理盐水组胃饲等量生理盐水。持续胃饲10 d后取材。
T淋巴细胞亚群的测定
流式细胞术检测荷瘤鼠脾脏CD3+T、CD4+T、CD8+T细数量、CD4/CD8比值，将小鼠颈椎脱臼处死,常规制备脾细胞悬液；TrisNH4Cl溶胀红细胞，计数，取106个细胞(200 μl体积)，加入荧光标记CD3、CD4、CD8抗体，避光冰浴45 min，冷PBS洗涤2次后，用流式细胞仪检测脾脏CD3+T、CD4+T、CD8+T细胞数量。
T淋巴细胞增殖能力的测定
依文献〔3，4〕方式：服用参贞合剂组小鼠于停药后第二天，与生理盐水对照组小鼠同时眼球放血处死，无菌取脾脏，制备脾脏细胞悬液，以完全IMDM培育液稀释。镜下计数脾细胞，调脾细胞浓度至5×106/ml。取%台盼蓝溶液1滴加4滴细胞悬液，观看活细胞数>95％。将不同组别的脾细胞悬液置于96孔培育板中100 μg/孔，加入ConA 100 μg/孔，终浓度为5 μg/ml。置CO2培育箱孵育48 h，掏出用倒置显微镜观看其细胞增殖情形。见有转化的大淋巴母细胞，即脾淋巴细胞已进入对数割裂期。每孔加入5 mg/ml MTT 10μl/孔，置CO2培育箱孵育6 h后掏出，贴壁吸上清液100 μl弃之，加入DMSO 100 μl/孔，充分振荡后，静止10 min，酶标仪测定（570 nm）。
IL
无菌取脾细胞悬液，采纳ELISA方式检测脾细胞上清IL含量，具体方式参照说明书进行。 统计学分析
采纳统计软件,实验数据均以x±s表示,定量资料采纳t查验,并进行单因素方差分析及组间均数不同的统计学分析。
2 结 果
2
2分泌能力检测
参贞合剂对S180荷瘤小鼠T细胞免疫功能的阻碍
