湖北省中医院 文件编号：HBTCM/LH-JL-TY -26-05 第1版第0次修订 分子生物组检测系统/方法分析性能验证评估报告
检验科分子生物组检测依据CNAS-CL02：《医学实验室质量和能力认可准则》（ISO 15189：2007）对医学实验室检测系统性能评价的相关要求，对ABI 7000 Real Time PCR System 荧光定量仪进行性能评价，主要从以下几个方面进行：正确度、精密度、临床可报告范围、线性范围等。具体实施方案如下： 1 目的：
对ABI 7000 Real Time PCR System 荧光定量仪的性能进行评价，结果与生产厂家给出的性能指标进行比较，来验证生产厂家给出的性能指标是否能满足检验科的要求。若无厂家性能指标则与卫生部室间质评计划表提供的标准比较，判断仪器的性能是否符合要求。 2 原理： 2.1 正确度评价
评价仪器测量结果与真值的一致程度。本组参加室间质评的项目一律用卫生部临检中心的室间质评回报结果作为评价标准。 2.2 精密度评价
采用EP15-A《用户对精密度和准确性能的核实实验-批准指南》的性能要求，通过检测每个项目2个不同浓度的混合血清和质控物值，计算项目重复精密度和中间精密度，并与厂家声明的重复精密度和中间精密度进行比较，核实是否与厂家声明的一致。 2.3 临床可报告范围评价
荧光定量PCR法HBV DNA检测试剂盒说明书中显示本检测系统临床可报告范围为1.00E3～1.00E8copies/ml。因试剂盒阳性参控品最高载量为1.00E8copies/ml，大于1.00E7copies/ml浓度已属临床高载量患者，符合抗病毒治疗指标，不必要对更高的载量进行精确检测，小于1.00E3copies/ml已为临床疗效监测效果较好的指标，大量研究表明，此群患者对抗病毒治疗不敏感，因此对疗效监测意义不大。 2.4 线性范围评价
因为每次实验都做标准曲线，并要求其R值在0.98以上。因此，本项目不需要进行线性验证。 3 检测方法：
检测方法为实时荧光定量PCR法。 4 方案：
4.1正确度评价方案（卫生部室间质评样品）
采用卫生部临检中心2011年第一次和第二次室间质评与2012年第一次和第二次室间质评
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湖北省中医院 文件编号：HBTCM/LH-JL-TY -26-05 第1版第0次修订 回报结果作为评价标准。 判定标准：绝对偏倚≤±0.4 4.2精密度评价方案
根据NCCLS EP15-A文件，重复精密度测定方案：取2个浓度患者的混合血清重复测定20次。中间精密度测定方案：采用1个浓度的质控物，每批次分析1次，测定30天。每天应进行正常的室内质量控制，在控后方可进行检测。所检测所有数据超出3SD的数据不能超过2个，否则应分析失控原因纠正后重新进行试验，统计数据，计算重复精密度和中间精密度，与允许范围或厂家声明的重复精密度及中间精密度比较，判断验证是否通过。 判定标准：
? 重复精密度：厂家声明值低值CV≤10.0%，高值CV≤10.0%； ? 中间精密度：厂家声明值低值CV≤10.0%，高值CV≤10.0%；
? 将重复CV(%)、中间CV(%)与厂商声称精密度值比较，若试验的精密度小于等于厂商声称精
密度值，则验证通过。
? 如果试验的精密度大于厂商声称精密度值，需要进一步计算该项的验证值，如果重复CV(%)、
中间 CV(%)小于验证值，说明差异无统计学意义，同样核实了与允许范围的一致性，验证通过。如二者数值很接近，为可靠起见，可以添加2个批次测量，将所得数据与以前数据合并再计算，可能得到更可靠的结果。
? 如重复CV(%)、中间 CV(%)大于验证值，精密度验证未通过，应与厂家联系并取得帮助。 4.3临床可报告范围评价方案
荧光定量PCR法HBV DNA检测试剂盒说明书中显示本检测系统临床可报告范围为1.00E3～1.00E8copies/ml。因试剂盒阳性参控品最高载量为1.00E8copies/ml，大于1.00E7copies/ml浓度已属临床高载量患者，符合抗病毒治疗指标，不必要对更高的载量进行精确检测，小于1.00E3copies/ml已为临床疗效监测效果较好的指标，大量研究表明，此群患者对抗病毒治疗不敏感，因此对疗效监测意义不大。 4.4 线性范围评价
因为每次实验都做标准曲线，并要求其R值在0.98以上。因此，本组项目不需要进行线性验证。 5 器材
ABI 7000 Real Time PCR System 荧光定量仪，详见附表一。 6 结果：验证结果符合相关规定，详见附表一。 7 结论：
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湖北省中医院 文件编号：HBTCM/LH-JL-TY -26-05 第1版第0次修订 ABI 7000 Real Time PCR System 荧光定量仪定量项目在正确度、精密度、临床可报告范围、线性范围等方面符合要求。
报告人：赵友云 2012年11月28日
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湖北省中医院分子生物组检测性能验证评估报告
附表一 检测系统/方法的分析性能验证评估表 序号 1 乙型肝炎病毒(HBV)DNA测定 ABI 7000 Real Time PCR System 1.正确度：绝对偏荧光定量仪，设备编号：270003297。 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法），国食药监械（准）字2009第3400437号；质控品：卫生部临检中心质控品，北京康彻思坦生物技术有限公司标准物质。 倚≤±0.4 2.精密度： 重复精密度 低值CV≤10.0% 高值CV≤10.0% 中间精密度CV≤10.0% 3.线性范围：不适用 4.可报告范围：1.00E+03～ 绝对偏倚：-0.4～0.14 批内： 高值CV1.58% 不适用 1.00E+03～1.00E+08 copies/ml 满足要求 项目参数 检测系统 验证标准 正确度 精密度 线性范围 可报告范围 评估结论 低值CV1.97%； 日间： CV6.93% 1.00E+08copies/ml
6 分子生物学组
