灰岩金线莲种子萌发与组培快繁技术研究
胡琦敏1，黄云峰1，2，张启伟1，2
【摘 要】摘要：【目的】利用灰岩金线莲种子无菌播种进行组培苗生产，为其工厂化组培育苗提供参考。【方法】采用灰岩金线莲种子为外植体，以MS或1/2MS为基本培养基，探讨不同激素组合对外植体进行无菌播种、原球茎增殖、丛生芽分化及生根壮苗的影响。【结果】采用0.1%升汞处理灰岩金线莲蒴果20 min，灭菌率可达100%，且种子萌发不受影响。在种子萌发培养基中添加香蕉泥有利于种子萌发，最适合种子萌发的培养基为1/2MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+60 g/L香蕉泥；在原球茎增殖培养中，低浓度的6-BA和NAA有利于灰岩金线莲原球茎增殖，最适合原球茎增殖的培养基为1/2MS+0.2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+60 g/L香蕉泥；丛生芽分化的最适培养为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+60 g/L香蕉泥+0.1%活性炭，原球茎分化丛生芽较多，生长势最佳；最适合灰岩金线莲生根壮苗的培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA+60 g/L香蕉泥+0.1%活性炭。【结论】利用灰岩金线莲种子进行无菌播种，通过原球茎增殖和分化，可获得大量优质组培苗，是实现工厂化育苗的理想途径。 【期刊名称】南方农业学报 【年(卷),期】2016(047)011 【总页数】6
【关键词】灰岩金线莲；无菌播种；原球茎增殖；丛生芽
0 引言
【研究意义】灰岩金线莲（Anoectochilus calcareus Aver.）为兰科
（Orchidaceae）金线兰属（Anoectochilus）多年生草本植物，是金线莲药材的植物来源之一。金线兰属植物在民间为珍稀名贵中药材，通称金线莲（金效华等，2002；陈谦海，2004），民间多用于治疗糖尿病、高血脂、乙型肝炎等疾病（福建中医药研究所，1982），素有“药王”、“金草”之称，市场需求量大。灰岩金线莲与其他当前种植的金线莲药用功效相似，且其植株大，产量高，是精品药材的优势种。但金线莲属种子在自然环境下极难萌发，野生资源较少，因此，人工种植是对金线莲种质资源保护及缓解供需矛盾的必要手段，而采用组织培养技术进行工厂化育苗，对灰岩金线莲资源的保护和开发利用具有重要意义。【前人研究进展】灰岩金线莲最先发现于越南，目前国内外对该种的研究较少，但近年来对金线兰属其他植物的组织培养研究相对较多。金线莲多以种子、茎段、茎尖为外植体，通过无菌播种、原球茎增殖、不定芽或丛生芽诱导、生根壮苗等阶段实现金线莲的组培快繁。在种子萌发、不定芽诱导及继代增殖培养基的选择上，伍成厚等（2008）利用1/2MS为基本培养基，添加1.0 mg/L 6-BA和1.0 mg/L NAA，播种45 d左右金线莲种子可发育成原球茎；罗庆国等（2011）以金线莲植株茎段为外植体，在基本培养基中添加不同浓度的植物生长调节剂，结果表明，不定芽诱导与继代增殖较适宜的培养基分别为MS+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT，MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA；罗安雄等（2012）利用1/2MS、MS、N6、KC、Harvais和Fast等6种培养基对福建金线莲进行种子萌发试验，结果发现在MS培养基中的萌发率最高。在外植体的选择方面，祁永琼等（2014）以金线莲顶芽、中部茎段、基部茎段为外植体进行对比试验，结果发现以顶芽为外植体时的诱导率、增殖倍数最高。在不定芽和丛生芽的诱导研究方面，李梅等（2005）在诱导台湾金线
莲丛生芽时发现，丛生芽增殖倍数随着6-BA浓度的升高而增高，添加NAA有利于丛生芽的诱导和分化，当添加6-BA 5.0 mg/L和NAA 1.0 mg/L时，丛生芽多且较粗壮；罗庆国等（2011）也发现较高浓度的6-BA更有利于金线莲丛生芽的继代增殖。在生根壮苗研究方面，不同品种添加不同的添加物及浓度对生根壮苗的影响不同。李梅等（2005）发现在台湾金线莲生根壮苗培养时添加2%活性炭和150 g/L香蕉汁有利于生根；而罗庆国等（2011）认为在金线莲生根壮苗培养基中加入20 g/L香蕉泥生根效果最佳。【本研究切入点】金线兰属植物野生资源日渐减少，组织培养是实现大面积人工种植的必要手段。灰岩金线莲为我国新记录种，但国内有关灰岩金线莲组织培养快速繁育的研究尚无文献报道。【拟解决的关键问题】利用灰岩金线莲种子为外植体，采用不同的灭菌方法和激素组合等进行组织培养快速繁育研究，以期获得快速、高效的金线莲组培苗生产技术，为灰岩金线莲的工厂化育苗提供技术支持和理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试材料为灰岩金线莲成熟蒴果内种子，采自广西那坡县。 1.2 试验方法
1.2.1 外植体灭菌 将成熟未开裂的灰岩金线莲蒴果用自来水冲洗表面尘土30 min，用洗洁精清洗蒴果表面后置于超净工作台上，用75%酒精浸泡30 s，然后随机分成两组：一组材料用10%次氯酸钠加两滴吐温-20，浸泡20或25 min，无菌水冲洗4～5次；另一组材料用0.1%升汞加两滴吐温-20，浸泡10或20 min，无菌水冲洗4～5次。以上处理以250 mL烧瓶为容器，每组浸泡5个蒴果，浸泡液以没过蒴果但不超过烧瓶的1/3容量为宜。以上处理组的种
灰岩金线莲种子萌发与组培快繁技术研究
