玉米叶绿体依赖NADPH硫氧还蛋白还原酶的原核表达及
活性分析
程雷;陈宗梅;程备久;范军
【期刊名称】《农业生物技术学报》 【年(卷),期】2011(019)003
【摘要】叶绿体依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)的硫氧还蛋白还原酶含有还原酶结构域和硫氧还蛋白结构域,每个结构域含有两个催化的Cys残基.利用RT-PCR克隆了编码成熟的依赖NADPH硫氧还蛋白还原酶基因,分别将还原酶结构域以及硫氧还蛋白结构域活性中心两个催化的Cys残基定点突变成Ser残基,将野生型和突变型基因分别插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-28b,转化至大肠杆菌BL21(DE3),表达的重组蛋白N端含有组氨酸标签.电泳检测显示野生型硫氧还蛋白还原酶的可溶性表达水平受诱导温度和共表达分子伴侣GroEL、GroES和GrpE影响,而蛋白突变体主要表达为包涵体.纯化的重组野生型蛋白SDS-PAGE上显示亚基分子量为52kD,分别以DNTB(6,6′-Dinitro-3,3′-dithiodibenzoic acid)和胰岛素为底物,确定了硫氧还蛋白还原酶两个结构域的催化活性.本研究结果表明,玉米NTRC在大肠杆菌可溶性表达,纯化的重组蛋白具有硫氧还蛋白和硫氧还蛋白还原酶活性.%Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate(NADPH) thioredoxin reductase from chloroplast contains reductase domain and thioredoxin domain. Each domain has the two catalytic cystein residues. Using RT-PCR method, the gene encoding the mature
NADPH
dependent
thioredoxin
reductase
from
玉米叶绿体依赖NADPH硫氧还蛋白还原酶的原核表达及活性分析
