流式细胞仪使用程序及SOP文件

由天下分享时间：2025/1/14 21:41:41 加入收藏我要投稿点赞

流式细胞仪使用程序及SOP文件 1.目的

规范流式细胞仪的相关使用操作、以及维护操作。 2.适用范围

适用于本实验室使用流式细胞仪。 3.职责

操作人员应熟练掌握并自觉遵守本标准操作程序。如需获得更多信息，请参阅该仪器用户手册。 4.支持性文件

流式细胞仪使用说明书。 5.操作规程

5.1仪器开/关机程序 5.1.1开机程序

5.1.1.1 检查仪器鞘液桶和废液桶。 5.1.1.2 打开流式细胞仪。

5.1.1.3 气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。 5.1.1.4 打开电脑。

5.1.1.5 等待机器预热5—10分钟后可开始实验。 5.1.2关机程序

5.1.2.1 用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。 5.1.2.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml。 5.1.2.3 将样品换成蒸馏水重复1-2步。

5.1.2.4 放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。 5.1.2.5 选择Standby模式10分钟。 5.1.2.6 关闭电脑，再关掉仪器。

5.2仪器校验和分析参数设置程序（FACSComp操作程序） 5.2.1CaliBRITE Beads 的准备

5.2.1.1 在装有1ml鞘液的FALCON管加一滴充分混匀CaliBRITE Beads，并标上unlabeled；若配有双激光做四色，则须在unlabeled管中再加一滴APC-beads；

5.2.1.2 在另一装有3ml鞘液的FALCON管加入unlabeled-、FITC-、PE-、PerCP-、和APC-beads（若做四色）各一滴，混匀，在管壁上标上mixed（PerCP不很稳定，最好在上机前加入）； 5.2.1.3 避光放置，准备上机。 5.2.2软件环境的设置

5.2.2.1 从苹果菜单进入，选择FACSComp软件；

5.2.2.2 在Sign In视窗中填入下列信息：操作者、机构、实验室主任（操作者是必须填入的，计算机将保存这些信息），点击Accept；

5.2.2.3 进入Set Up视窗，在Assay Selection中，选择你需要的Assay：Lyse/Wash、Lyse/No Wash或HLA-B27 Calib；在CaliBRITE Beads Lot Ids中，根据每一种beads所对应的编码输入Lot ID；在Automatic Saving Options中，你可以选择自动保存或不保存Summary Report，你可以通过单击Location来更改文件名以及保存的位置；最后在Set Up视窗的右下角点击Run。 5.2.3Beads的检测

5.2.3.1 将功能键放在RUN的位置，流速设成HI，将混匀的标有unlabeled的试管放在支撑架上，点击Start，开始调节PMT，如软件在unlabeled试管中测到APC-beads，则在PMT调节完后，马上进行时间延迟的调校；如果调试成功，会出现“Time Delay Calibration was successful”，然后直接进入补偿视窗；如果调试不成功，你有5秒钟的时间决定是再试一次，还是重复开始的PMT调节，或是继续到下一步调节补偿；若你在5秒内还没有决定，软件自动进到补偿的视窗。如果你在时间调校失败的基础上继续补偿的调节，那么你所得到的FL3-%FL4和FL4-%FL3的值会有较大的变化；

5.2.3.2 在支撑架上换成混匀的标有mixed试管，点击Start，开始调节补偿，补偿调试成功后，FACSComp自动进行灵敏度调试，点击Start，开始调试灵敏度；调试完成后，软件计算结果，并将所有的结果都保存于Calib File或Calib File.LNW中，同时给出Summary Report；

5.2.3.3 从支撑架上移走装有beads的试管，换上蒸馏水，并将功能键换成STAND BY。

5.3仪器操作程序

5.3.1抗体标记

5.3.1.1 取FALCON管加对应荧光抗体，再加标本，涡漩振荡数秒； 5.3.1.2 避光室温放置20分钟；

5.3.1.3 加1×溶血素2ml，涡旋振荡数秒； 5.3.1.4 避光室温放置15分钟；

5.3.1.5 离心，1000 rpm×5分钟、室温； 5.3.1.6 弃上清后加2 ml PBS，涡旋振荡数秒； 5.3.1.7 离心，1000 rpm×5分钟、室温； 5.3.1.8 弃上清后加0.5ml PBS，准备上机。

以上为全血标本，如是细胞培养液则无需加溶血素，直接1.6-1.8操作；如是全血不洗标本则加定量的溶血素，避光室温放置15分钟后，直接上机。 5.3.2流式细胞仪分析

5.3.2.1 从苹果菜单进入，选择操作软件；

5.3.2.2顺序输入样本姓名，点击Run Tests，得到分析结果。 6.日常维护和保养 6.1每日保养

6.1.1 用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。 6.1.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml。 6.1.3 将样品换成蒸馏水重复1-2步。

6.1.4 放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。 6.1.5 选择Standby模式10分钟。 6.1.6 关闭电脑，再关掉仪器。 6.2每月保养

6.2.1 将10%漂白剂装入鞘液桶。 6.2.2 旁路鞘液过滤器,以防损害。