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胶乳凝集试

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胶乳凝集试验

【实验目的】

1.学习凝集反应的类型及原理

2.掌握胶乳凝集试验检测血清中的类风湿因子的方法 【实验原理】

1.凝集反应是一种血清学反应。颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应抗体结合,在有电介质存在的条件下,经过一定时间,出现肉眼可见的凝集小块。参与凝集反应的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素。根据凝集反应发生的条件分为玻片法和试管法,也可分为直接凝集反应和间接凝集反应两类。胶乳凝集试验也是一种间接凝集试验,它是以聚苯乙烯胶乳微粒作为惰性载体。

——类风湿因子的检测

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2. 胶乳凝集试验检测血清中的类风湿因子的原理: 类风湿因子主要为IgM类自身抗体,但也有IgG类、IgA类、IgD类和IgE类,是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体,可与IgG的Fc段结合。胶乳凝集试验是将变性IgG包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上,此致敏胶乳在与待测血清中的RF相遇时,即可发生肉眼可见的凝集。胶乳凝集试剂是由纯化的人IgG和羧化聚苯乙烯胶乳共价交联而成的抗原胶乳。RF胶乳超过20U/ml即出现肉眼可见的凝集颗粒。如出现大颗粒凝集的为阳性反应,保持均匀乳液状为阴性反应。根据阳性阴性反应即可知血清中是否有类风湿因子。检测类风湿因子对类风湿性关节炎(RA)的诊断、分型和疗效观察有着重要的意义。 【实验材料】 1.待测血清

2.类风湿因子(RF)测定试剂盒(胶乳凝集法):

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胶乳液成份:类风湿因子胶乳、牛血清白蛋白、磷酸盐缓冲液; 阳性对照成份:羊抗人 IgG 抗血清、牛血清白蛋白、磷酸盐 缓冲液;

阴性对照成份:牛血清白蛋白、磷酸盐缓冲液。 3.微量加样器,反应板 【实验方法】

1. 标记:取四个反应板孔,标记1号为待测,2号为阳性对照,3号为阴性对照,4号为空白对照。

2. 加样:取待测血清,加入4个孔中,每孔加20μl。1号加50μl胶乳液,2号加阳性对照成份50μl,3号加阴性对照成份50μl 。 3. 搅匀:轻轻晃动,充分混和。2-3分钟后观察结果。 【实验结果】

正常参考范围:成人<20IU/ml 目测法:与阳性和阴性对照比较,

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凝集出现可判断样本中RF>20IU/ml阳性; 无凝集出现可判断样本中RF<20IU/ml阴性。 【注意事项】

1.加试剂和阴性、阳性对照,保证滴液大小一致。 2.若阴阳性对照结果出现异常,则试剂不可使用。

3.试剂盒贮存2-10摄氏度,受热会导致试剂阳性率偏高,切勿冷冻。

4.阴阳性对照经检HbsAg,HCV,HIV为阴性,但仍须如病人样品 一样小心处理。 【参考文献】

1、吕绳凯等:上海医院检验杂志4(2):97.1989

2、Galiving,.P.et al;Clin.lab.Assays 4:73-95(1983)

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胶乳凝集试

可编辑胶乳凝集试验【实验目的】1.学习凝集反应的类型及原理2.掌握胶乳凝集试验检测血清中的类风湿因子的方法【实验原理】1.凝集反应是一种血清学反应。颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应抗体结合,在有电介质存在的条件下,经过一定时间,出现肉眼可见的凝集小块。参与凝集反
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