《基因工程》思考题
第一章 绪论
1. 简述基因操作、基因重组和基因工程的关系。
2. 为什么说基因工程是生物学和遗传学发展的必然产物？ 3. 简述基因的结构组成对基因操作的影响。
4. 谈谈你对gene的认识，并简要说说gene概念的演变过程. 5. 如何理解gene及其产物的共线性和非共线性？
6. 试从理论和技术两个方面谈Gene Engineering诞生的基础.
第二章 基因工程的基本原理与支撑技术
1. 试比较原核基因组与真核基因组的结构和功能特点
2. 试比较原核基因和真核基因表达调控的主要方式和特点 3. 分析比较琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的异同点？ 4. 琼脂糖凝胶电泳中，简述影响DNA在凝胶中迁移速率的因素.
5. 小量制备质粒DNA，用质粒中特定的酶切发现切割不动，试分析可能原因及克服方法？ 6. 在基因操作实践中有哪些检测核酸和蛋白质分子量的常规方法？ 7. 印迹分子杂交有哪些种类，并说明在什么情况下需要使用这些方法。 8. 核酸分子的标记有哪些方法，各有何特点？
9. 由mRNA反转录成cDNA和DNA的PCR扩增是两个完全不同的酶催化反应过程，如何将两个过程联系在一起，实现由mRNA起始扩增出DNA？ 10. Primer是PCR反应体系的四大要素之一，PCR的许多应用都是通过primer设计来实现的，请问primer设计的一般原则是什么？
11. 在PCR反应的后期，或者循环次数过多时，反应体系中就会出现一种所谓的平台效应（Plateau effect），请问什么叫Plateau effect？产生Plateau effect的原因有哪些？ 12. 在对PCR产物进行电泳检测时，有时会出现拖带或非特异性扩增条带，请分析其原因？如果检测结果是看不到DNA带或DNA带很弱，那又是为什么？
13. 通过双向蛋白质电泳发现某蛋白质与某植物的一种表型密切相关，若要利用编码该蛋白质的基因来转基因植物，试问如何分离得到该基因？
14. 现有一序列已知的DNA片段和一序列未知的DNA片段，你分别如何设计测序策略？ 15. 设想一下在什么情况下你希望知道一个基因或一段DNA的序列？
16. 什么叫有性PCR？有性PCR导致DNA重组的分子机制跟体内重组有何异同？
17. Explain the PCR. List the steps in carrying it out; include all the components and special conditions, explaining why each one is used. Illustrate the process with appropriate labels. Use the correct scientific terminology in your explanation.
第三章 基因工程操作的基本条件
1. 试指出影响限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）切割效率的因素.
2. 在酶切缓冲液中，一般需加入BSA，请问加入BSA的作用是什么？并简述其原理？ 3. 何谓Star activity？简述Star activity的影响因素及克服方法.
4. 某DNA序列中存在DpnI酶切位点，以此DNA为模板，在体外合成DNA序列，当用该酶进行酶切时，发现切割不动，试分析可能原因？
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5. 天然的质粒载体（plasmid vectors）通常需经改造后才能应用，包括去除不必要的片段，引入多克隆位点等。试问在此过程中如何增减酶切位点？
6. 当向细菌培养基中加入氯霉素时，可以使细菌质粒的拷贝数得到扩增，试分析其原理. 7. 抗性基因（Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理.
8. 常用的受体细胞有哪些? 各有什么特点?
9. 在基因工程中,选择受体细胞时要考虑什么问题?
第四章 基因工程的基本操作过程
1. 简述大肠杆菌的经典转化操作过程。
2. 用作电转化的宿主细胞也必须处于“感受态”，这种感受态与传统的感受态有何不同？ 3. 电转化技术还有哪些应用？ 4. DNA转化有哪些方法，各有何优点？
5. Explain what restriction enzymes are, what they do and why they were key to starting the genetic engineering revolution. Show how restriction enzymes produce sticky and blunt end cuts. Draw a typical restriction enzyme site and explain what a palindromic site is. 6. 基因克隆的筛选方法主要有哪些？它们的技术特征是什么？
7. List the basic steps involved in GENETIC ENGINEERING and describe what each component does. Draw a picture showing the various steps in cloning the Insulin gene.
8. 抗性基因（Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理.
9. 何为α-complement？如何利用α-complement来筛选插入了外源DNA的重组质粒？ 10. 以pUC18系列为载体，外源基因经酶切和载体连接后，将其导入处于感受态的宿主细胞中，筛选菌落，设计一个实验证明外源基因能在宿主细胞中转录表达。
第五章 目的基因的克隆和基因文库的构建
1. 简述目的基因的克隆策略。
2.采用同聚物加尾的方法进行dscDNA克隆，一般采用dC/dG而不采用dA/dT，简述其原因？ 3.克隆cDNA常见的问题是什么？
4.如何使用Methylase对克隆DNA进行保护？此步骤有什么意义？ 5. cDNA法克隆目的基因的局限性表现在哪里？
6.构建大片段基因组文库过程中需要注意哪些问题？ 7.均一化cDNA文库构建的基本原理是什么？
8. 何谓基因组DNA文库？何谓cDNA文库？两者有何区别？
9. 在构建基因组文库的过程中，最需要注意的问题是什么？如何解决？
10. 何谓基因文库的代表性？在构建基因文库的过程中，要提高文库的代表性，通常采用什么策略？
第六章 基因表达体系及其应用
1. 试比较外源基因在细菌中三种表达方式（融合蛋白、分泌蛋白、包涵体）的优缺点。 2. 试述细菌基因工程的发展现状及前景。
3. 工程酵母和工程细菌在表达外源蛋白时有何显著的区别？
4. 举例说明酵母基因工程相对于大肠杆菌基因工程的优势与不足。 5. 一个酵母表达载体应包括哪些基本元件？
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6. 简述附加型表达载体和整合型表达载体在表达外源基因上的区别。 7. 如何改善酵母工程菌的表达质量？
8. 酿酒酵母表达系统的不足之处表现在哪里？ 9. 如何实现酵母工程菌高效表达外源蛋白？
第七章 基因工程菌的大规模培养
1. 与普通的微生物发酵相比，基因工程菌发酵有何特点？ 2. 基因工程菌的不稳定性表现在哪里？如何改善？ 3. 常见的深层培养方式有哪些?有什么特点?
4. 根据目前啤酒生产存在的问题，你认为基因工程技术在改良啤酒生产菌株方面有哪些可做的工作？
综合:
专业术语解释 1. marker gene
2. genetically modified organisms 3. Insertional inactivation
4. Competent cell 5. gene
6. gene cloning
7. In situ colony hybridization 8. complementary DNA cloning 9. cloning vector 10. gene library 11. clone
12. genetic engineering 13. Southern blot
14. expression vector
15. Polymerase chain reaction 16. restriction enzyme 17. selectable marker 18. gene probe
19. recombinant DNA technology 20. plasmid
1. 试以pUC18为例说明pUC系列质粒在基因工程中得到最广泛应用的原因。 2. 试述利用α-complement筛选重组子的原理。
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3. 试述提高外源基因在大肠杆菌细胞中表达水平的措施及其依据。
4. 如何获得目的基因？其策略和选择原则是什么?
5. 试以pBR322为例说明一个理想的质粒载体必须具备的条件. 6.试述影响限制性内切酶活性的因素及对策。 7. 试述核酸分子杂交的基本原理。
8. 试比较原核基因组和真核基因组的结构与功能特点。
9.写出利用毕赤酵母生产乙肝表面抗原的技术过程,并与酿酒酵母表达系统相比较，评价其经济性。
10. 试述利用大肠杆菌生产分泌型人胰岛素的两条技术途径,并对其优越性进行评价。
11. 写出从细菌基因组中克隆糖化酶基因并通过微生物基因工程技术生产糖化酶的基本步骤。
12.试对人血清白蛋白的市场现状和前景进行分析,并比较不同酵母细胞表达人血清白蛋白的优劣.
13. 基因工程载体应具备什么条件？。 14. 试述构建基因组文库的目的和意义
15. 与真核表达系统相比，原核表达系统的基因表达有何特点？ 16. 如何科学地看待基因工程技术对人类社会的影响？ 1. 第四次工业大革命
（1）医药：抗病毒剂、抗癌因子、新型抗生素、疫苗、抗衰老保健品、心脑血管药物、生长因子、诊断试剂等
（2）轻工食品产业：氨基酸、助鲜剂、甜味剂、淀粉酶、纤维素酶等 （3）能源：二次采油、燃料乙醇 （4）环境保护：生物材料、超级降解细菌 （5）信息产业：生物芯片、生物电脑 第二次农业革命 （1）生物农药
（2）抗除草剂、抗病虫害农作物 （3）高产、优质新品种
（4）抗逆（抗寒、抗旱、耐盐）农作物 （5）家畜品种改良 （6）生物固氮
第四次医学大革命-----基因疗法
基因工程技术可能给自然环境和人类健康带来潜在威胁 （1）生态安全：植物杂草化、益虫减少
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（2）食品安全：毒理作用、过敏反应、激素污 染、抗生素抗性 （3）产业安全 2. 对生物安全性的担忧
生物安全一般是指由现代生物技术开发和应用所能造成的对生态环境和人体健康产生的潜在威胁，以及对其所采取的一系列有效预防和控制措施
17. 试述应对外源基因过量表达带来不利影响的策略及其依据。
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