中药化学成分的预试验检测方法汇总
系统预试法——应用一些简单的定性试验,对中药中所含各类化学成分作全面检查。 单项预试法——依照需要,有重点的检查某类成分或某药效成分。
方法:试管反应+薄层层析检查
中草药要紧来源于植物。植物的化学成分较复杂,有些成分是植物所共有的,如纤维素、蛋白质、油脂、淀粉、糖类、色素等。有些成分仅是某些植物所特有的,如生物碱类、甙类、挥发油、有机酸、鞣质等。
各类化学成分均具有一定的特性,一样可由药材的外观、色、嗅、味等作为初步检查判定的手段之一。如药材样品折断后,断面不油点或挤压后有油迹者,多含油脂或挥发油;有粉层的多含淀粉、糖类;嗅之有专门气味者,大多含有挥发油、香豆精、内酯;有甜奈者多含糖类;味假设者大多含生物碱、甙类、苦味质;味酸者含有有机酸;味涩者多含有鞣质等等。
中草药所含化学成分均为多类的混合物,分析经常常互相干扰,不易得到正确结果。因此需依照中草药所含各种化学成分的溶解度、酸碱度、极性等理化性质,再用各类成分的鉴别反应加以鉴别。 一、 预试溶液的制备
1、水提取液——糖、多糖、有机酸、皂苷、酚类、鞣质、氨基酸、多肽、蛋白质…… 2、乙醇提取液——酚类、鞣质、有机酸、香豆素、强心苷、黄酮、蒽醌、甾体…… 3、5%HCl-乙醇提取液——生物碱
4、石油醚提取液——甾体、萜类、脂肪油…… 〔一〕鉴别本卷须知 1.依照各灰成分不同性质,选用适宜的溶剂提取,以保证等成分能被提取出来。 2.检品提取液的浓度应足以达到各该反应的灵敏度。
3.检品提取液的酸碱度〔pH〕值应不致阻碍鉴别反应中所需要的pH值。相差甚大时应事先调剂。
4.提取液较深时,常易阻碍观看鉴别反应的成效,现在可适当稀释,或进一步提纯。
5.鉴别反应时应注意防止多类成分的相互干扰,以免显现假阳性,或颜色不正等情形。最好在化学鉴别的同时,做空白试验和对比试验〔用含某类成分的中草药或纯品做阳性对比〕。
6.在鉴别试验中,假如某一类成分的几个鉴别反应结果不一致时〔即有的呈阳性反应,有的呈阴性〕那么应进行全面分析。第一应注意呈阳性反应的试验是否属于该类成分的专一反应,否那么应检查其他类成分能否产生该反应,从多方面加以判定。但也应注意,某些反应只能对某一类成分中的某个化学基团呈性反应,如检查黄酮类的盐酸――镁粉试验,它只对黄酮类中的羟基黄酮类〔黄酮醇类〕反应明显,其余类的黄酮类那么不甚明显,但也不能轻易否定不是黄酮类,为了幸免孤立和片面的下结论,一定要全面考虑综合分析。
中草药化学成分一样鉴别试验屯只是一个初步判定,最后确证尚需进一步提纯,以鉴定后才能予以确信。 〔二〕鉴别方法
1、 氨基酸、多肽、蛋白质
〔1〕加热沉淀试验:加热煮沸 →混浊或沉淀 〔蛋白质〕
+5%H2SO4〔不加热〕→混浊或沉淀
〔2〕双缩脲反应:+40%NaOH,1%CuSO4 →紫色、红色或紫红色〔多肽、蛋白质〕 〔3〕茚三酮反应:+0.2%茚三酮试液 →蓝或蓝紫色〔氨基酸、多肽、蛋白质〕 〔4〕吲哚醌反应:+吲哚醌试液 →各种颜色〔氨基酸〕
〔5〕Millon反应:+Hg,H2NO2 →红色〔蛋白质分子中有酪氨酸组成〕
〔6〕Hopkins-Cole反应:+乙醛酸,浓硫酸 →各色〔蛋白质分子中有色氨酸组成〕 〔7〕氨基酸的薄层层析检查:吸附剂——硅胶G
展开剂—— n-BuOH,n-BuOH:HAc:H2O 显色剂——0.25%茚三酮试液 →紫红色斑点
〔1〕加热或矿酸试验:取检品的水溶液1ml于试管中,加热至沸或加5%盐酸,如发生混浊或有沉淀示含有水溶性蛋白质。
〔2〕缩二脲试验:取检品的水溶液1ml,加10%氧化钠溶液2滴,充分摇匀,逐步加入硫酸铜试液,随加摇匀,注意观看,如出现紫色或紫红色示可能含有蛋白质和氨基酸。
凡蛋白质结构中含有两个或两个以上肽键〔-CONH-〕者均有此反应,能在碱性溶液中与Cu2+生成仙络合物,出现一系列的颜色反应,二肽呈蓝色,三肽呈紫色,加肽以上呈红色,肽键越多颜色越红。
〔3〕茚三酮试验,取检品的水溶液1ml,加入茚三酮试液2-3滴,加热煮沸4-5分钟,待其冷却,出现红色棕色或蓝紫色〔蛋白质、胨类、肽类及氨基酸〕。 氨基酸与茚三酮的水合作物作用,氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳,而茚三酮被还原成仲醇,与所后成的氨及另一分子茚三酮缩合生成有蓝紫色的化合物。 【注】①茚三酮试剂要紧是多肽和氨基酸的显色剂,反应在1小时内稳固。试剂溶液pH值以5-7为宜,必要时可加吡啶数滴或醋酸钠调整。 ②此反应专门灵敏,但有个别氨基酸不能呈紫色,而呈黄色,如脯氨酸。 〔4〕氨基酸薄层层析检出反应: ①吸附剂:硅胶G。
②展开剂:〔1〕正丁醇:水〔1:1〕〔2〕正丁醇:醋酸:水〔4:1:5〕 ③显色剂:0.5%茚三酮丙酮溶液,喷雾后于1100烘箱放置5分钟,显蓝紫允或紫色。 2、 皂苷
〔1〕泡末试验:振摇 →大量连续性泡末
+0.1M HCl 二管泡末高度相同〔三萜皂苷〕 +0.1M NaOH 碱管高于酸管〔甾体皂苷〕 〔2〕溶血试验:+2%红血球悬浮液 →溶血
〔3〕Lieberman—Burchard反应:+醋酐-浓硫酸—— 紫红色〔三萜皂苷〕 黄-红-紫-污绿〔甾体皂苷〕 〔1〕泡沫试验:取检品的水溶液2ml于带塞试管中,用力振摇3分钟,即产生持久性蜂窝状泡沫〔坚持10分钟以上〕,且泡沫量许多于液体体积的1/3。
【注】常用的增溶剂吐温、司盘,振摇时均能产生持久性泡沫,要注意区别。 〔2〕溶血试验:取试管4支,分别加入滤液0.25、0.5、0.75 ml,然后依次分别加入生理盐水2.25、2.0、1.75、1.5 ml,使每一个试管中的溶液都成为2.5ml, 再将各试管加入2%的血细胞悬液2.5ml,振摇平均后,同置于370水浴或25-270的室温中注意观看溶血情形,一样观看3小时即可,或先滴红细胞于显微镜下,然后滴加检液看血细胞是否消逝。如有溶血现象示正反应。
【注】①鞣质对血红细胞有凝集作用,干扰溶血试验的观看,应事先除去〔可用取胜酰胺粉吸附或用明胶沉淀〕。 ②检液应为中性溶液。 〔3〕醋酐浓硫酸试验〔Liebrmann Burchard反应〕取检品的水溶液置蒸发皿中,于水浴上蒸干,残渣加入少量冰醋酸使溶解,再加入醋酐浓硫酸〔19:1〕试液,出现红紫色并变成污色绿色〔甾类、三萜类成分或皂甙〕
〔4〕区别甾体皂甙和三萜皂甙:取带塞试管两支,各盛检品的水溶解1 ml,1支加0.1N盐酸溶液2ml,另一支加0.1N氢氧化钠溶液2ml用力振摇1分钟〔需左右手交替振摇各半分钟〕,观看两管泡沫的多少,假设两管泡沫体积相同或酸管多,示含三萜式皂甙;假设加碱管泡沫多于加酸管示含甾示含甾体皂甙。
三萜皂甙为酸性皂甙在酸性水溶液中形成较稳固的泡沫;甾体皂甙为中性皂甙在碱笥溶液中能形成较稳固的泡沫。
浓硫酸、高氯酸、高氯酸-香草醛、浓硫酸-香草醛等的显色原理要紧是使羧基脱水,增加双键结构,再经双键位移,双分子缩合等反应生成共轭双键系统,又在酸作用下形成阳碳离子盐而显色
3、 糖和苷
〔1〕斐林试剂:+硫酸铜、酒石酸钾钠 —— 砖红色沉淀〔还原糖〕
〔—〕+1%HCl +NaOH 沉淀〔苷元〕 △30min 上清液〔+〕
〔多糖、苷〕
〔2〕Molish反应:+α-萘酚-浓硫酸 →紫红色环
〔3〕银镜反应:+0.1N硝酸银、5N氨水 →银褐色〔还原糖〕 〔4〕薄层层析检查::吸附剂——硅胶G或纤维素
中药化学成分的预试验检测方法汇总
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