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2、 某突变菌株在基本培养基上无法生长，而在添加了0.1%碱水解酵母核酸后，该菌株能生长。请设计一实验方案以进一步确定该菌株的生长必需物。
3、 连续培养和连续发酵有何优点？但为什么连续的时间总是有限的？ 4、 在微生物培养过程中，引起pH改变的原因有哪些？在实践中如何保证微生物处于较稳定和合适的pH环境中？
99年答案 一 是非题
1 对2 错3 错4 错5 错6 错7 错8 错9 对10 错 二 填充题
1a 细胞质中；1b细胞膜中；1c细胞膜外；1d第三 2a重复； 2b易位或倒位； 2c缺失； 2 d插入
3aF X174，M13,fd,f1,细小DNA病毒等； 3b细小RNA病毒（脊髓灰质炎病毒，口蹄疫病毒）弹状病毒（狂犬病病毒）劳氏肉瘤病毒，烟草花叶病毒，MS2,f2R,17等。 4a即基因突变; 4b抗药性质粒(R因子）的转移; 4c生理上的适应。 5a 细菌质粒； 5b噬菌体。
6a吸附;6b侵入; 6c增殖（复制与生物合成）; 6d成熟（装配）; 6f裂解（释放）。 7a诱导法 7b筛选法
8a 延迟期； 8b对数期； 8c稳定期； 8d衰亡期。
9a碳源; 9b氮源; 9c能源; 9d生长因子; 9e无机盐; 9f水. 10a琼脂
三 简述下列概念的区别
1、 类病毒是当今所知道的最小、只含有RNA一种成分、专性细胞内寄生的分子生物。病毒也是一类超显微的非细胞生物。病毒比前者大，同时含有核酸和蛋白质等，一般不能通过种子传播。
2、 蜗牛酶是玛瑙螺胃液制成的，内含纤维素酶、甘露聚糖酶、葡糖酸酶、几丁质酶和脂酶等，它对酵母等真菌的细胞壁有良好的消化作用。而溶菌酶广泛存在于卵清、人的眼泪和鼻涕、部分细菌和噬菌体内的一种酶，它能有效地水解细菌的肽聚糖，从而消化细菌的细胞壁。
3、 包含体是某些感染了病毒的宿主细胞内出现的光学显微镜下可见，形态和数量不等的小体。而伴孢晶体是某些芽孢杆菌在其形成芽孢的同时，在芽孢旁形成的一颗菱形或双锥形的碱溶性的蛋白晶体。两者都能作为生物农药。
4、 菌丝体是丝状微生物相互缠绕、交织形成的结构。子实体是由气生菌丝体特化形成的，有一定形态的结构，在其里面或上面可产生孢子。
5、 协同反馈抑制指分支代谢途径中的几个末端产物同时过量时才能抑制共同途径的第一酶的反馈调节方式。而合作反馈抑制是指两种末端代谢产物同时存在时，可以起到比一种末端产物大得多的抑制作用。
6、 定向培育是用某一特定的因素长期处理某微生物群体，同时不断地对它进行移种传代，以达到累积并选择相应自发突变株的目的。而诱变是指利用物理或化学诱变剂处理微生物群体，促进其突变率，从中挑选少数符合要求的突变株的育种方法。
7、 真核生物是指其细胞具有细胞核，有核膜、核仁，有多条染色体，细胞质中有线粒体、高尔基体、内质网等细胞器，核糖体为80S；原核生物指其细胞没有真正意义的核，没有核膜、核仁，只有一条裸露的DNA，没有线粒体、高尔基体、内质网等细胞器，核糖体为70S。
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8、 把经紫外线照射后的微生物立即放在可见光下，可明显降低其死亡率的现象称光复活作用。经紫外线照射形成的胸腺嘧啶二聚体在黑暗下会被以种光复活酶结合，当这复合物暴露在可见光下，此酶会因获得能量而产生解离作用，将二聚体从新分解成单体。在活细胞中，还存在一种修复被紫外线等诱变剂损伤的DNA的机制。该修复作用与光无关。它涉及四种酶的参与。
9、 野生型是从自然界分离到的任何微生物在其发生营养缺陷突变前的原始菌株。它能在相应的基本培养基上生长；营养缺陷型是野生型经诱变处理后，由于发生了丧失某酶合成能力的突变形成的菌株。它只能在加入该酶合成产物的培养基中生长。
10、 有性杂交指性细胞间的接合和随之发生的染色体重组，并产生新遗传型后代的一种育种方法；准性杂交类似于有性杂交，但比它更原始。它可使同种生物两个不同菌株的体细胞发生融合，且不以减数分裂的方式而导致低频率的基因重组并产生重组子。 四 问答题
1. 鉴别性培养基是在培养基中加入能与某菌的五色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而用肉眼就能将其与其他外形相似的菌落区分。EMB培养基中大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+,故可染上酸性染料伊红，又因伊红与美蓝结合，使菌落呈深紫色。从菌落表面反光还可看到绿色金属闪光。而产酸弱的菌株的菌落呈棕色。不发酵乳酸的菌落无色透明。
2. 首先，它是核酸营养缺陷型。可采用生长谱法，分别配制缺A、G、C、T和U其中一物的混合液，添加到该菌的基本培养基中，将该菌株分别接入到不同的培养基中，即可判断是哪种或哪几种核苷酸缺陷型。
3. 微生物可长期保持在指数期的平衡生长状态和稳定的生长速率。可简化装料、灭菌、出料和清洗发酵罐等单元操作，从而减少了非生产时间和提高设备利用率；便于自控。产品质量稳定。节约大量的人力、动力、水和蒸汽，且使水、汽、电的负荷均匀合理。恒浊法中的微生物以最高速度生长，生产中可获得大量菌体或与菌体生长相平行的代谢产物。恒化法可用于与生长速率相关的各种理论的研究。其缺点主要使菌种易退化，其次是易染菌，且染菌的危害会较大。这也是连续时间总是有限的根本原因。
4. 微生物的生命活动会引起环境pH 改变。它们将糖类发酵形成有机酸，将脂肪水解成有机酸，选择性吸收无机盐的正电部分，则会引起培养基pH下降；而蛋白质的脱羧反应形成胺类，选择性吸收无机盐的酸根，都会引起pH上升。
治标的方法是通过加酸或碱进行中和反应。治本的方法有，过酸时，加适量的氮源，提高发酵的通气量；过碱时，适当增加碳源，降低通气量。
98年研究生入学试卷
一. 是非题（共10分。只需注明“对”或“错”） 1、 大多数嗜热菌的G-C含量高于中温菌。
2、 大肠杆菌属低等原核生物，所以其遗传物质只是一条松散的环状双链DNA，不存在DNA高级结构。
3、 当菌体生长、氧吸收和糖利用的比速度下降时，青霉素的合成达到最高值。 4、 初生F’菌株和次生F’菌株都属于部分二倍体。
5、 分批培养时，细菌首先经历一个适应期，此期间细胞处于代谢活动的低潮，所以细胞数目并不增加。
6、 渗透酶( permease)属于诱导酶，而其它种类的酶往往属于组成酶。 7、 恒化培养与恒浊培养的区别在于前者的培养物群体始终处于对数生长期。
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8、 将HR病毒的外壳蛋白与TMV病毒的RNA混合，去感染烟草，则会出现TMV型病灶。若在感染前，用TMV抗体处理，则会钝化病毒，不出现TMV型病灶。 9、 霉菌的基因重组常发生于准性生殖时，较少出现在有性生殖过程中。
10、 营养物跨膜的主动运输必需依靠载体和能量，而被动扩散不需要载体和能量。 二 填充题（30分）
1 突变率10-10表示_ _ _ _ a_ _ _ 。
2 我们常采用_ _ a_ _ _ 浓度的NaCl 或0.1M_ _ _ b_ _ _ 来稀释菌液或清洗菌体细胞。因为_ _ c_ _ _ 。
3 在有机物为基质的生物氧化反应中，以氧为电子传递最终受体的方式称_ _ _ _ a_ _ _ _ ；以无机氧化物为最终电子受体的称_ _ b_ _ ；以有机物为最终电子受体的称_ _ _ _ c_ _ _ _ 。
4 常见的菌种保藏方法有_ _ _ _ a_ _ _ _ 、_ _ _ b_ _ _ 和_ _ _ c_ _ _ 等，其中_ _ _ d_ _ 方法保藏菌种的时间最长久。
5 对细菌简单染色法的一般步骤是_ _ _ a_ _ _ 。常用的染料有_ _ b_ _ 和_ _ c_ _ _ 等。
6 在混合菌样中获得纯菌株的方法主要有_ _ _ a_ _ _ 和_ _ b_ _ 等。
7 在微生物培养过程中，引起培养基pH值改变的原因主要有_ _ _ a_ _ _ 和_ _ _ b_ _ _ 等。
8 实验室常用的有机氮源有_ _ a_ _ _ 和_ _ _ b_ _ _ 等，无机氮源有_ _ c_ _ _ 和_ _ _ d_ _ 等。为节约成本，工厂中常用_ _ _ e_ _ _ _ 等做有机氮源。
9 霉菌细胞壁化学组成是 a ；酵母菌细胞壁化学组成是 b 和 c 等；细菌细胞壁化学组成主要是 d ；
10 在微生物学奠基时代（生理学期）公认的代表人物为_ _ _ a_ _ _ 和_ _ _ b_ _ _ 。前者的主要业绩有_ _ c_ _ 等，后者的主要业绩有_ _ _ d_ _ _ 等。 三 简述下列概念的区别（15分）：
fed-batch culture ;continuous culture colony ;cloning
complete medium ;minimal medium species ;strain COD ; BOD
四 问答题（30分）
1、 将色氨酸（T）营养缺陷型菌株与组氨酸（H）营养缺陷型菌株进行遗传重组后，在基本培养基上长出的菌落数8个，而在含T的基本培养基上能长出72个菌落，在含H的基本培养基上能长出68个菌落。如果互补的重组类型数相等，试计算T与H间的重组频率。 2、 为什么有些突变菌株对末端代谢产物的结构类似物具有抗性？试举例说明这些菌株对工业菌种选育的重要性。
3、 何谓分解代谢物阻遏？在含乳糖和葡萄糖的培养基中，E.coli生长周期中会出现什么现象？请从操纵子模型来解释这现象。 4、 用图示法表示酿酒酵母的生活史。 五 推导题（15分）
在细胞的指数增长阶段细胞的传代时间tg可由下式计算： 式中：t为时间，xt为t时刻的细胞数，x0为初始细胞数
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98答案
一 是非题：每题1分
1 对2 错3 对4 错5 错6 错7 错8 错9 错10 错
二 填充题（30分）
1a: 1010个细胞分裂成2×1010个细胞时，平均发生1次突变。 2 a：0.85%; 2b: 磷酸盐； 3c：与细胞等渗，防止细胞损伤。 3a：有氧呼吸； 3b：无氧呼吸； 3c：发酵
4 a：斜面冰箱保藏法 4b：冷冻干燥保藏法 4c：石蜡油封藏法 4d：冷冻干燥保藏法 5a：涂片、干燥、固定、染色、水洗、（镜检） 5b：美蓝； 5c：结晶紫。 6a：稀释涂布平板法； 6b：划线平板法。 7a：F X174； 7b：烟草花叶病毒。
8a：蛋白胨； 8b：牛肉膏； 8c：(NH4)2SO4； 8d：Na2NO3; 8e：豆饼粉 9a:几丁质 9b：甘露聚糖； 9c：葡聚糖； 9d：肽聚糖
10a：巴斯德； 10b：柯赫； 10c：巴斯德消毒法； 10d：微生物纯培养法 三 简述下列概念的区别：（每题5分）
1、 连续培养是按特定的控制方式以一定的速度加入新鲜培养基和放出培养物的培养方法。其中微生物的生长速度稳定；补料分批培养是一种介于分批培养和连续培养之间的培养方式。它是在分批培养的过程中，间歇或连续地补加新鲜培养基的培养方法。其中微生物的生长速度并不一定稳定。 2、 菌落指单个细胞在有限空间中发展成肉眼可见的细胞堆。cloning指从同一祖先产生同一DNA（目的基因）分子群体或细胞群体的过程。或指将外源基因引入到宿主菌体内，并使其大量扩增的过程。
3、 完全培养基是能满足一切营养缺陷型菌株营养要求的培养基。是天然或半合成的培养基。基本培养基仅能满足某野生型菌株生长需要的最低成分培养基。
4、 是由一个独立分离的单细胞繁殖而成的纯种群体及其后代。一种菌的每一不同来源的纯培养物均可称为该菌种的一个菌株。所以，属于同一菌种的菌株是无数的。菌种是一大群表型特征高度相似、亲缘关系极其相近、与同属内其实种有明显差异的菌株的总称。 5、 化学耗氧量反映有机物进入水体后，在一般情况下氧化分解所需的氧量。反映水体总的污染程度。生物耗氧量水体中有机物经生物氧化至简单终产物是所需的氧量。反映水中有机物含量的间接指标。COD数值一般高于BOD。
四 问答题（30 分）
2×8/（68+72）=11.4%
1、 解除了末端代谢产物反馈抑制或和阻遏。A调节亚基发生变异。B操纵子的控制基因发生变异，产生的调节蛋白对类似物不敏感。
2、 结构类似物会与调节酶的调节亚基或和阻遏酶的原阻遏物结合，从而发生反馈抑制或和阻遏。结构类似物不能参与正常代谢，所以会使未突变细胞饥饿而死。而解除了反馈调节的菌株对结构类似物就具有“抗性”。以此为筛子可筛选到大量积累末端代谢产物的菌株。 3、 分解代谢物阻遏指细胞内同时存在两种分解底物时，利用快的那种分解底物会阻遏利用慢的底物的有关酶的合成的现象。会出现二次生长现象。
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浙江大学工业微生物92-97
1992 年攻读硕士学位研究生入学考试试题 一 填空（共15分）
1、 细菌一般进行 a 繁殖，即 b 。酵母的繁殖方式分为有性和无性两类，无性繁殖又可分为 c ， d 两种形式，有性繁殖时形成 e ；霉菌在有性繁殖中产生的有性孢子种类有 f ， g ， h ；在无性繁殖中产生的无性孢子种类有 i ， j ， k ；放线菌以 l 方式繁殖，主要形成 m ，也可以通过 n 繁殖。 2、 一摩尔葡萄糖通过EMP途径和TCA循环彻底氧化，在原核微生物中产生 a 摩尔ATP，在真核微生物中产生 b 摩尔ATP，这是因为在真核微生物中， c 不能通过线粒体膜，只能借助于 d 将EMP途径产生的磷酸二羟丙酮还原成 e ，后者可进入线粒体，将氢转移给 f ，形成 g ，自身又回复到磷酸二羟丙酮。这一过程称为“穿梭”，每次穿梭实际损失 h 个ATP。 3、 微生物基因突变的机制包括 a 、 b 及 c 。诱发突变的方法分为物理方法和化学方法，物理方法主要是 d ， e ， f 和 g ；化学诱变剂包括 h ， i 和 j 。 二是非题（叙述正确的在括号写T，错误的写F，共10分） 1、自养型、专性厌氧型微生物不是真菌（） 2、在酵母细胞融合时，用溶菌酶破壁（） 3、从形态上看，毛霉属细菌都有假根（）
4、营养缺陷型菌株不能在基本培养基上正常生长（） 5、产黄青霉在工业生产上只用于生产青霉素（）
6、分子氧对专性厌氧微生物的抑制和制死作用是因为这些微生物内缺乏过氧化氢酶（） 7、同工酶是指能催化同一个反应，有相同控制特征的一组酶（）
8、基因位移是借助于酶或定向酶系统实现的主动输送，因此不需要消耗能量（） 9、培养基中加入一定量NaCl的作用是降低渗透压（）
10、噬菌体的RNA必须利用寄主的蛋白质合成体系翻译，因此只能在寄主体内繁殖（） 三. 名词解释（共15分）
1、抗代谢物2、 温和噬菌体3、 阻遏酶4、 转化5、 活性污泥 四在恒化器中培养微生物，在稳态操作时，μ=D，D为稀释率，μ可用Monod公式描述： 求：a. 恒化器出口底物浓度S0和微生物浓度X0
b. 当稀释率D增加到一定程度后会产生“清洗”现象，求发生清洗现象的最小稀释率Dcrit
c. 单位体积细胞产率可以用细胞出口浓度X0与稀释率的乘积DX0表示。求当DX0达到最大值时的稀释率Dmax
五. 简要叙述工业微生物研究和实验中的微生物培养基必须具备的要素和对于大规模生产时对培养基的基本要求。（15分）
六. 以肌苷酸生产菌为例，说明营养缺陷型菌株筛选的机理及筛选的方法。（15分） 七. 试述革兰氏阳性菌和阴性菌在细胞壁组成上的差别，并判断下述几种微生物的染色结果是什么。
a. 枯草芽孢杆菌 b. 金黄葡萄球菌 c. 大肠杆菌 d. 乳链球菌 e.假单孢菌
1993年攻读硕士学位研究生入学考试试题
一 填空（共15分，每格0.5分）
多所大学的微生物考研试题.pdf
