60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76
③等待至少1小时以保证pH达稳。
④加入磷酸盐溶液至不同的终浓度，最终反应体系为250mL。
⑤溶液在37°C条件下孵育，直至达到最大镧 - 磷结合。
上述全过程需进行pH监测, 必要时进一步调节pH值。 酸预处理步骤主要是为了加速片剂溶解并促进平衡结合研究。结合试验应至少包含8个不同的磷酸盐浓度，包括达到结合平台的最高磷酸盐浓度，约最高磷酸盐浓度1 /10 的最低磷酸盐浓度，以及介于最高和最低之间的其余磷酸盐浓度。磷酸盐结合曲线应反映出快速上升段和达到平台的特征。每个浓度应在pH 1.2、pH 3.0和5.0条件下进行。对于每组条件下，溶液应在37℃孵育直至达到最大镧 - 磷结合。在每个磷酸盐浓度条件下，受试制剂和参比制剂应各重复12次。
3. 检测物质
未结合的磷酸盐（用以计算磷酸盐结合量）。
4
77 78 79 80 81 82 83 84 85 86
4. 评价指标
动力学结合研究应采用相似因子（f2）法对受试制剂和参比制剂在一定范围磷酸盐浓度和pH条件下的镧-磷结合相似性进行比较。
平衡结合研究应计算每个pH条件下的Langmuir结合常数k1和k2。同时还应计算：①受试制剂与参比制剂k1比值；②受试制剂与参比制剂k2比值的90%的置信区间。
计算公式：
磷酸盐平衡结合研究推荐采用Langmuir-type方程来描述：
87 88
整理后：
89 90 91 92 93
其中，Ceq代表平衡时，溶液中（未结合的）磷酸盐的浓度，用毫摩尔浓度表示（mM）；x代表平衡时，与药物结合的磷酸盐的量,用毫摩尔数表示（mmol）；m代表使用药物的量，用克表示（g）；k1为亲和力常数；k2为结合能力常数。
5
94 95 96 97 98 99 100 101 102
以Ceq为横坐标（X），以 为纵坐标（Y），进行
线性回归，得到线性方程。从斜率（a）和截距（b）可计算k1和k2：
k1 = a/b k2 = 1/a
90%CI的统计分析：
对于受试制剂和参比制剂来讲，磷酸盐结合试验应为平行设计，k2均值比的90%置信区间的计算公式为：
90%CI = k2均值比± t0.05, df *SEQ
式中：SEQ为k2均值比的标准误；Q为k2均值比；SEMA 为A制剂k2均值的标准误；SEMB 为B制剂k2均值的标准误；A 为A制剂k2均值；B为B制剂k2均值。
5. 生物等效性判定
在上述不同pH条件下，受试制剂与参比制剂k2比值的90%的置信区间均在80.00%-120.00%范围内。
注意：此处为原值比值，非对数转换。
103 104 105 106 107 108 109 110
6
111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131
三、体内研究
若选择通过体内研究证明生物等效性，可采用药效学终点在健康成年受试者中进行研究。最适宜的终点为尿磷排泄的变化。
应首先在严格饮食控制的条件下，使用参比制剂进行探索研究，以确定关键性BE研究的最敏感剂量，估计样本量。
四、生物等效性研究豁免 （一）体外研究的豁免要求
若同时满足以下条件，可豁免500 mg和750 mg规格制剂的生物等效性试验：1）1000 mg规格制剂符合生物等效性要求；2）各规格制剂在不同pH介质中体外溶出曲线相似；3）各规格制剂的处方比例相似。 （二）体内研究的豁免要求
若同时满足以下条件，可豁免其他规格制剂的生物等效性试验：1）最敏感剂量药效学终点的生物等效性研究符合要求；2）各规格制剂在不同pH介质中体外溶出曲线相似；3）各规格制剂的处方比例相似。
五、参考文献
1.国家药品监督管理局. 碳酸镧咀嚼片说明书. 2012. 2. U.S. Food and Drug Administration. Draft Guidance on Lanthanum Carbonate. May 2017.
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3. European Medicines Agency. Guideline on equivalence studies for the demonstration of therapeutic equivalence for locally applied, locally acting products in the gastrointestinal tract. October 2018.
4. Yang YS, Shah RB, Yu LX, et al. In vitro bioequivalence ap-proach for a locally acting gastrointestinal drug: lanthanum car-bonate[J] . Mol Pharm, 2013, 10(2) : 544 - 550.
5.Yang YS, Bykadi S, Carlin AS, et al. Comparative evaluation of the in vitro efficacy of lanthanum carbonate chewable tablets[J]. J Pharm Sci, 2013, 102(4) : 1370 - 1381.
8
10.《碳酸镧咀嚼片生物等效性研究技术指导原则(征求意见稿)》
