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急性髓系白血病FLT3基因突变的研究

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急性髓系白血病FLT3基因突变的研究

叶丽1, 纪濛濛2, 孙自敏2*

【摘 要】摘要:目的:检测初发AML患者FLT3基因突变,探讨其在AML疾病特征和预后评估中的意义。方法:应用聚合酶链反应(PCR)检测54例初发成人AML患者的骨髓标本FLT3基因突变。结果:54例初发成人AML患者中FLT3-ITD突变检出率为22.22%,发生FLT3-ITD基因阳性的AML患者中伴染色体正常核型10例(占83.3%),复杂异常核型2例(占16.7%)。FLT3-ITD基因突变阳性的AML患者的白细胞及骨髓白血病细胞比例显著高于未发生突变者(P<0.05),但在性别、年龄、诱导化疗第1疗程CR率、生存率等方面两组之间差异无统计学意义。2例出现FLT3-TKD基因突变的患者与FLT3-TKD阴性AML患者相比,在初诊时性别、年龄、白细胞计数、骨髓原始细胞比例以及第1疗程CR率差异均无统计学意义。结论:FLT3-ITD突变阳性在染色体正常核型AML患者中比例较高;FLT3-ITD突变的阳性组在外周血白细胞数量和骨髓原始细胞数量方面明显高于该突变阴性组患者。 【期刊名称】中国实验血液学杂志 【年(卷),期】2015(023)002 【总页数】6

【关键词】FLT3基因; FLT3基因突变; 急性髓细胞白血病 ·论著·

J Exp Hematol 2015; (2):322-327

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)是一组起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病,基因突变是肿瘤细胞除染色体异常以外的重要遗传学改变的

特征。FLT3基因突变存在于部分AML中。FLT3-ITD基因突变后其酪氨酸激酶的活性增高,可导致自发激活,引起RAS和信号转导和转录激活子5信号转导途径激活,促进细胞增殖,与AML的发生、进展存在较密切关系,已被公认是AML发生率最高的一种基因改变。研究证实,FLT3-ITD突变对AML的影响主要体现在长期预后上, FLT3-ITD突变意味着更短的总生存期(overall survival, OS)、无病生存期(disease-free survival, DFS)、无事件存活期(event-free survival,EFS)和更高的累计复发率(Cumulative relapse rate, CRR)。本研究对初发AML患者FLT3基因内部串联复制(internal tandem fuplication, ITD) 及酪氨酸激酶结构域(tyrosine kinase domain, TKD)基因突变与临床特征、治疗效果、与其他基因共同表达的意义及预后进行研究。

材料和方法

病例资料

病例来自2011年11月至2012年12月在安徽医科大学附属省立医院及附属六安医院住院54例成人初治患者,经MICM分型确诊的AML。患者性别:男29人,女25人,中位年龄45岁(19-79岁),诊断标准依据FAB的分型标准。随访时间截止至2013年2月28日,失访者截至失访日期,中位随访时间9(1-14)个月。4例正常骨髓作为阴性对照。 基因组DNA制备

应用DNA试剂盒(北京Tiangen公司)提取DNA,取5 μl收集的DNA,应用紫外分光光度仪测定样本的OD值,所有用于PCR的DNA样本的OD260∶OD280比值均>1.8,去离子水稀释DNA至100 ng/μl,剩余DNA放于-80度冰箱冻存。

目的基因的PCR扩增

根据GenBank上的目标基因序列,其中FLT3分两段扩增,参照文献,由美国Invitrogen公司合成引物ITD-F:5′-GCAATTTAGGTATGAAAGCCAGC-3′,ITD-R:5′-C TTTCAGCATTTTGACGGCAACC-3′,PCR产物长度329 bp;D835-F

5′-GCTCGGAATCTGCAAAAGAT-3′

D835-R

5′-

CACCACAGTGAGTGCAGTTG-3′,PCR产物长度480 bp。FLT3-ITD基因的扩增应用,25 μl反应体系:10×PCR buffer 2.5 μl+MgCl2 (25 mmol/L) 3 μl+dNTP(10 mmol/L) 0.5 μl+引物F(10 μm) 0.33 μl+引物R(10 μm)0.33 μl+Taq酶(5 U/μl,上海生工生物工程公司) 0.2 μl,用去离子水补足体积,混匀,离心后分装,每管加入DNA标本50 ng。PCR反应条件:FLT3-ITD及FLT3-TKD基因扩增的反应条件:94 ℃预变性5 min;然后94 ℃变性30 sec,57.5 ℃退火45 sec, 72 ℃延伸5.5 sec,40个循环,最后72 ℃延伸7 min。PCR产物:经2%琼脂糖凝胶电泳后,分别在不同时间点在紫外灯下观察并照相,确定成功扩增出目标条带。 基因测序

将成功扩增54例的PCR产物送至上海华大基因公司测序。 染色体核型分析

采用短期培养胰酶消化G显带技术,根据细胞遗传学国际命名体制(ISCN2005)判定核型。 治疗方案

AML-M3治疗方案 依据2011年急性早幼粒细胞白血病治疗指南[1],诱导治疗应用全反式维甲酸(ATRA)/三氧化二砷(As2O3)/蒽环类(柔红霉素、去甲氧柔

急性髓系白血病FLT3基因突变的研究

急性髓系白血病FLT3基因突变的研究叶丽1,纪濛濛2,孙自敏2*【摘要】摘要:目的:检测初发AML患者FLT3基因突变,探讨其在AML疾病特征和预后评估中的意义。方法:应用聚合酶链反应(PCR)检测54例初发成人AML患者的骨髓标本FLT3基因突变。结果:54例初发成人AML患者中FLT3-ITD突变检出率为22.22%,发生FLT3-IT
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