天津医药2024年7月第47卷第7期
683细胞与分子生物学HCVCore基因真核表达载体构建及其对
HeLa细胞自噬的影响
王敏敏1，魏建宏2，任来峰3△
摘要:目的的影响。方法
构建丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白（Core）真核表达载体，并研究其对人宫颈癌HeLa细胞自噬功能以HCV复制子质粒pJFH1为模板，PCR法扩增HCVCore基因片段，经纯化回收后与PLVX-IRES-
ZsGreen1载体用同源重组法相连，构建PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒，并经测序验证其序列的正确性。转染宫颈癌HeLa细胞，并设PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒转染组、PLVX-IRES-ZsGreen1空载体转染对照组以及检测自噬生物标记物微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达水平。结果
未转染质粒空白对照组，通过免疫印迹法验证HCVCore蛋白在HeLa细胞中的表达，并用免疫荧光（IF）和免疫印迹
获得PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒，
测序结果表明构建的重组质粒序列完全正确，HCVCore重组蛋白可在HeLa细胞中有效表达；免疫荧光和免疫印迹结果表明，HCVCore过表达细胞LC3焦点和LC3Ⅱ蛋白表达水平明显增多，PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒转染组的细胞LC3Ⅱ水平（1.069±0.049）高于PLVX-IRES-ZsGreen1空载体转染对照组（0.776±0.047），差异有统计学意义（P＜0.05）。结论自噬。
关键词：丙型肝炎；肝炎病毒属；病毒核心蛋白质类；自噬；重组质粒中图分类号：R34，R373.21
文献标志码：A
DOI：10.11958/20242209
成功构建了PLVX-IRES-ZsGreen1-Core重组质粒，HCVCore蛋白过表达可诱导HeLa细胞
ConstructionofeukaryoticexpressionvectorofHCVCoregeneanditsinfluenceonautophagyofHeLacells
1DepartmentofNursing,FenyangCollegeShanxiMedicalUniversity,Fenyang032200,China;2DepartmentofAnatomy,DepartmentofBasicMedicine,FenyangCollegeShanxiMedicalUniversity;3ImmuneDepartment,ShanxiCancerHospital
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WANGMin-min1,WEIJian-hong2,RENLai-feng3△CorrespondingAuthor
E-mail：rlaifeng@163.com
investigatetheeffectofHCVCoreproteinontheautophagyofhumancervicalcancerHeLacells.Methods
Abstract：ObjectiveToconstructeukaryoticexpressionvectorofhepatitisCvirus(HCV)coreprotein,and
Thefragment
ofcorewasobtainedbyPCRfromHCVrepliconplasmidpJFH1.Afterpurificationandrecovery,theDNAfragmentwas
connectedwiththePLVX-IRES-ZsGreen1vectorusingthehomologousrecombinationmethod.DNAsequencingwasusedtransfectioncontrolgroupandcontrolgroupwithouttransfectionplasmidblank.Westernblotassayandimmunofluorescenceassociatedprotein1lightchain3,LC3)inHeLacells.Results
toverifythecorrectnessofthesequence.PLVX-IRES-ZsGreen1-corewastransfectedintoHeLacells.Cellsweredivided
intoPLVX-IRES-ZsGreen1-corerecombinantplasmidtransfectiongroup,PLVX-IRES-ZsGreen1emptycarrier(IF)wereappliedtodetecttheexpressionofHCVCoreproteinandtheautophagy-relatedbiomarker(microtubule-obtained.Thesequencingresultsshowedthatthesequenceofrecombinantplasmidwascompletelycorrected,andtheHCVCoreproteincanbeeffectivelyexpressedinHeLacells.TheresultsofWesternblotassayandimmunofluorescencealsoinPLVX-IRES-ZsGreen1emptyvectortransfectioncontrolgroup(0.776±0.047,P<0.05).Conclusion
Keywords：hepatitisC；hepacivirus；viralcoreproteins；autophagy；recombinantplasmid
showedthatLC3ⅡproteinlevelandLC3fociwereincreasedsignificantlyincellswithHCVCoreprotein.ThelevelofLC3IIwassignificantlyhigherinPLVX-IRES-ZsGreen1-Corerecombinantplasmidtransfectiongroup(1.069±0.049)thanthatexpressionvectorofHCVCoreissuccessfullyconstructed,andtheHCVCoreproteincaninduceautophagyinHeLacells.
基金项目：山西省自然科学基金项目（2014021037-9）；山西省大学生创新创业训练计划项目（2014052)
作者单位：1山西医科大学汾阳学院护理系（邮编032200）；2山西医科大学汾阳学院基础医学部解剖教研室；3山西省肿瘤医院免疫室作者简介：王敏敏（1990），女，硕士，助教，主要从事肿瘤免疫学方向研究
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PLVX-IRES-ZsGreen1-corerecombinantplasmidwas
Theeukaryotic
通讯作者E-mail:rlaifeng@163.com
HCV Core基因真核表达载体构建及其对HeLa细胞自噬的影响 - 论文
