1.5cm
点样线尽量点得细窄而均匀,宁少勿多
2、电泳：
①薄膜粗面向下 ②点样端臵阴极端
③两端紧贴在滤纸盐桥上，膜应轻轻拉平 电压：110V 时间：50min
3、染色和漂洗：
电泳完毕后，关闭电源，将膜取出，直接浸于染色液中5min。
取出膜，尽量沥净染色液，移入漂洗液中浸洗脱色（一般更换2次），至背景
颜色脱净为止。
取出膜，用滤纸吸干即可。 注意事项：
1、所用血清应新鲜，无沉淀物及细菌滋生。 2、使用时勿将各时段所应用的溶液浓度弄错。
3、上样时，滴管应沿柱上端内壁加入样品，动作应轻、慢，勿将柱床冲起。流洗平衡时亦应如此。
4、洗脱时应注意及时收集样品，切勿使蛋白质峰溶液流失，并注意层析柱不要流干，进入空气。
5、切勿将检测蛋白质的磺基水杨酸与检查SO42-的BaCl2混淆，因二者与相应物质生成的沉淀均为白色。
6、葡聚糖凝胶价钱昂贵，要回收再生,避免损耗，严禁倒掉!
【实验报告第二部分（实验记录）：①主要实验条件（如材料的来源、质量；试剂的规格、用量、浓度；实验时间、操作要点中的技巧、失误等，以便总结实验时进行核对和作为查找成败原因的参考依据）；②实验中观察到的现象（如加入试剂后溶液颜色的变化）；③原始实验数据。评分（满分20分）：主要实验条件：
1、0.3mol/LpH6.5醋酸铵（NH4AC）缓冲液：称取NH4AC 23.12g，加蒸馏水800ml溶解，滴入稀氨水或稀醋酸液（注意混合均匀），调节pH至6.5后，补加蒸馏水至1000ml。 2、0.06mol/LpH6.5 NH4AC缓冲液：取上液用蒸馏水做5倍稀释。 3、0.02mol/LpH6.5 NH4AC缓冲液：取上液用蒸馏水做3倍稀释。
4、1.5mol/L NaCl-0.3mol/L NH4AC溶液：称取NaCl87.7g溶于0.3mol/LpH6.5 NH4AC溶液中至1000ml。
5、饱和硫酸铵溶液：称取固体(NH4)2SO4850g加入1000ml蒸馏水中，在70-80℃下搅拌促溶，室温中放臵过夜，瓶底析出白色结晶，上清液即为饱和硫酸溶液。 实验现象：
饱和硫酸铵加入到血清后有沉淀生成，沉淀呈米黄色，上清液呈淡黄色。 原始实验数据：
将3条经染色的醋酸纤维素薄膜并列，使点样线位于同一水平，以正常血清蛋白图谱为对照，观察提纯的物质属哪种蛋白。所得的照片如下图：
XX】
血清清蛋白、γ-球蛋白纯度鉴定的电泳图谱
【实验报告第三部分（结果与讨论）：①结果（定量实验包括计算）：应把所得的实验结果（如观察现象）和数据进行整理、归纳、分析、对比，尽量用图表的形式概括实验的结果；②讨论：不应是实验结果的重述，而是以结果为基础的逻辑推论。③结论：简单扼要，说明本次实验所获得的结果。（包括思考题）。评分（满分45分）：
XX】
结果：从电泳图谱中可以看出，清蛋白第一管和清蛋白第二管的蛋白质与血清的清蛋白电泳图
谱几乎一致，可以确定管内的蛋白质为清蛋白，同理球蛋白管内的蛋白质为γ-球蛋白。 讨论：清蛋白第1、2管均含有少量杂质，γ-球蛋白管中的γ-球蛋白纯度较低，导致最终的电
泳图谱与血清的电泳图谱有略微偏差。
结论：本次试验所获得的结果基本与预期试验结果相一致。 思考题：
1.硫酸铵盐析一步,为什么是0.8ml血清加0.8ml饱和硫酸铵?
答：因为清蛋白和球蛋白的盐析浓度不一样，使用半饱和硫酸铵溶液可以使球蛋白沉淀而清蛋
白不沉淀，0.8ml血清和0.8ml饱和硫酸铵混合可以形成半饱和硫酸铵溶液从而达到分离的目的。
2.为什么实验中DEAE纤维素柱分离γ-球蛋白后不用再生,可直接用于纯化清蛋白?
答：因为缓冲液都一样并且分离球蛋白后DEAE纤维素柱的成分没有发生改变，可以继续用于纯
化清蛋白。
3.应用醋酸纤维素薄膜电泳鉴定分离纯化后的血清清蛋白和γ-球蛋白的纯度,根据什么来确定它是清蛋白还是γ-球蛋白?判定它们纯度的依据是什么?
答：根据各自的电泳图谱与正常血清蛋白图谱作对照来确定它是清蛋白还是γ-球蛋白。判定它
们纯度的依据是染色后颜色的深浅，深的说明纯度高，浅的说明纯度低。
生化实验报告模版
