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全血乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法)
简介:
乳酸(Lactic acid,LD)又称2-羟基丙酸是一种化合物,是一种含有羟基的羧酸,分子式是C3H6O3,参与生物化学很多反应过程。乳酸检测有化学氧化法、酶催化法、电化学法、酶电极感应器法。
全血乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)其检测原理是在NAD存在条件下,乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸生成丙酮酸,同时生成NADH。在碱性条件下显色剂与丙酮酸生成复合物,并使平衡偏向乳酸氧化为丙酮酸的方向,驱动反应完成,生成的NADH与乳酸为等量摩尔。通过酶标仪测定340nm处吸光度,据此通过比色分析就可以计算出全血或血浆中LD水平。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:
编号 TC0737 名称 100T 0.5ml 6瓶 25ml 0.4ml 2ml Storage 试剂(A): 乳酸标准(1mmol/L) 试剂(B): 蛋白沉淀剂 试剂(C): LD Assay buffer 试剂(D): LD显色液 使用说明书 D1: LD显色液A D2: LD显色液B 4℃ 避光 RT 避光 -20℃ 避光 -20℃ 避光 -20℃ 避光 1份 操作步骤(仅供参考):
1、 配制蛋白沉淀工作液:取1瓶蛋白沉淀剂,直接加入蒸馏水至100ml,充分混匀,即
为蛋白沉淀工作液。4℃避光保存1周有效。该试剂有一定腐蚀性,请小心操作。 2、 配制空白对照液:取配制好的蛋白沉淀工作液蒸馏水,混匀,即为空白对照液。4℃避
光保存1周有效。
3、 制备无蛋白上清液:抽血前,取试管或离心管编号,分别称重(Wt)并记录,加入6ml
蛋白沉淀工作液,再次分别称重(Wm)并记录,冰浴或4℃保存备用。
4、 全血LD加样操作:按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔,溶液应按照顺序依次加入,
并注意避免产生气泡。如果样品中的LD浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔。
加入物(μl) 空白对照液 空白孔 10 标准孔 — 测定孔 — 北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com
乳酸标准(1mmol/L) 无蛋白上清液 LD Assay buffer 充分混匀 LD显色液 — — 200 10 — 200 — 10 200 23 23 23 5、 全血LD检测:室温放置,用酶标仪检测,以空白孔调零,标准孔、测定孔的340nm
吸光度(A标准、A测定),一般应数小时内检测完毕。
计算结果:
血清、血浆乳酸(mmol/L)=(A测定/A标准)×1.0×D 式中:A测定=测定管的吸光度值
A标准=标准管的吸光度值 D=(Wb-Wt)/(Wb-Wm)
也可根据NADH毫摩尔吸光度计算:血清、血浆乳酸(mmol/L)=A(D/0.1)
测定×(2.33/6.22)×
参考区间: 全血乳酸 血浆乳酸 脑脊液乳酸 成年人尿液乳酸排出量
0.5~1.7mmol/L(5~15mg/dl) 0.54~1.82mmol/L(5.4~16mg/dl) 0.5~1.7mmol/L(5~15mg/dl) 5.5~22mmol/d 注意事项:
1、 本法适用于自动分析仪,分别监测测定管和标准管的吸光度升高速率,计算乳酸的浓
度。
2、 如果没有分光光度计,也可以使用酶标仪测定。
3、 抗凝剂用肝素钠-氟化钠较好。抗凝血样品置于冰浴中送检,尽快分离出血浆等。 4、 草酸抗凝剂对LDH有一定的抑制作用。
5、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:6个月有效。