《组织细胞培养技术》课程教学大纲
课程编码：26990214 课程名称：组织细胞培养技术
英文名称：Cell and tissue culture technology 开课学期：第二学期 授课对象：统招硕士 开课院系：基础医学院
开课教研室：病理学与法医学教研室
学时：40 （其中理论学时：20 实验学时：20 ） 学分：0.5
课程类型：公共选修课 （公共必修课/选修课/专业课） 选用教材：自编教材《组织细胞培养技术》
主要参考书：⑴鄂征主编. 组织培养和分子细胞学技术.北京：北京出版社，1994。⑵施新猷主编.实验动物学. 北京：人民军医出版社，2000。 大纲编写人员：张宏颖副教授
一、 课程目的与任务
组织细胞培养技术是研究组织和细胞的技术方法，被培养的组织和细胞也是实验研究的对象。本课程是医学临床与基础专业硕士研究生的公共选修课程之一，在医学各专业高级人才培养中具有重要地位。本课程系统介绍了组织和细胞培养技术有关的概念、基本原理、操作程序和关键技术，及其在医学研究和临床实践中的应用，该领域的研究历史和最新发展动态；转基因动物技术的概念、研究进展、技术方法、建立方法、应用及前景展望。旨在提升医学专业硕士研究生的知识结构，掌握现代生物技术中的基本实验技能，培养学生开拓创新的能力，适应未来学科发展对人才的需求。 二、教学基本要求
本课程系统地论述了组织细胞培养技术的理论和方法，简要介绍了转基因动物技术及应用。要求学生全面系统地掌握组织细胞培养的操作过程，了解各种操作的基本原理；有判定细胞生长好坏和是否发生污染的能力；熟悉体外培养细胞的生存条件、细胞的生物学性状和与此有关的基本理论知识，了解国内外细胞培养的最新动态和研究进展，了解转基因动物技术的概念、研究进展、技术方法、建立方法、应用，并能自行根据需要设计实验，运用所学技术解决科研中的实际问题，提高学生综合分析问题，系统利用专业知识的综合素质。 三、各章节内容及学时分配
第一章 组织培养技术的基本理论知识（4.5学时） 目的与要求
1、 掌握组织培养基本概念；了解对组织培养的评价；熟悉对组织培养工作者的要求和工作方法。 2、 了解体内外细胞的差异与分化；掌握培养细胞形态分类及培养细胞的大体形态；熟悉组织培养
细胞的生长和增殖过程。 3、 熟悉培养细胞生存环境和条件。
4、 掌握体外培养细胞成功的关键步骤；熟悉体外培养细胞成功所需要的条件。
5、 熟悉体外培养细胞的种类和命名；掌握建立细胞系或细胞株的要求；熟悉已建立细胞系或细胞
株的鉴定、管理和使用的规则。 教学内容
第一节 组织培养基本概念（0.5学时）
1、组织培养基本概念：组织培养、细胞培养、器官培养 2、 对组织培养的评价：组织培养的优点与缺点 3、 对组织培养工作者的要求和工作方法
本节重点、难点：组织细胞培养所涉及的基本概念 第二节 组织培养细胞生物学（2学时）
1、体内外细胞的差异与分化：体内外细胞的差异的表现，分化的概念、机制、细胞分化的关键 2、培养细胞形态分类：贴附型和悬浮型；贴附型：成纤维型、游走型、上皮型和多形型 3、培养细胞的大体形态：贴附型和悬浮型；体外培养活细胞的形态及细胞机能状态不良的形态 4、组织培养细胞的生长和增殖过程：传代；组织培养细胞生命期：原代培养期、传代期、衰退期 本节重点、难点：体内外细胞的差异与分化；培养细胞的形态分类；传代的概念；原代培养期、传代期、衰退期的概念及特性。
第三节 培养细胞生存环境和条件（0.5学时） 1、无污染环境 2、温度
3、气体环境和氢离子浓度
4、体外培养细胞生存所需基本物质：糖、氨基酸、促生长因子、元素、促细胞贴附物质 5、渗透压
6、培养基：合成培养基、天然培养基、无血清培养基
7、附着底物：锚着依赖性的概念；几种常见的附着底物玻璃、一次性塑料、微载体、饲细胞 8、抑制细胞生长因素 9、细胞代谢和调控
本节重点、难点：无污染环境；温度；气体环境和氢离子浓度；培养基；附着物 第四节 体外培养细胞成功率的分析（1学时） 1、组织和细胞供体年龄 2、培养条件 3、贴附底物 4、培养方法
本节重点、难点：体外培养细胞成功的关键步骤 第五节 建立细胞系或细胞株（0.5学时）
1、体外培养细胞的种类和命名：初代培养、细胞系、克隆细胞株、肿瘤细胞系或株、有限细胞系、无限细胞系、亚系、二倍体细胞、遗传缺陷细胞；几个常见的肿瘤细胞系或株的名称 2、建立细胞系或细胞株的要求：组织来源、细胞生物学检测、培养条件和方法 4、 已建立细胞系或细胞株的鉴定、管理和使用
本节重点、难点：初代培养、细胞系、克隆细胞株、肿瘤细胞系或株的概念；建立细胞系或细胞株的要求。
第二章 组织培养设施和基本条件（2学时） 目的与要求
1、掌握组织细胞培养实验室的设计原则和组织培养工作包括的内容 2、熟悉无菌操作设施和工作间的布局与使用 5、 熟悉实验室设备及使用原理 4、熟悉器械及培养器皿 教学内容
第一节 实验室设计：设计原则和组织培养工作包括的内容 第二节 无菌操作设施和工作间 1、净化工作台 2、无菌操作室 3、无菌操作箱作 4、清洗和准备区 5、温育和贮存区 6、观察和研究区 第三节 实验室设备 1、电热恒温箱 2、电热干燥箱 3、冰箱 4、显微镜 5、水纯化装置 6、洗刷装置 7、抽滤装置 8、细胞冷冻贮存器 9、离心机 10、天平 11、加样器 第四节 器械
第五节 培养器皿 1、玻璃瓶皿 2、塑料平皿
本章重点、难点：无菌操作设施和工作间的布局与使用，培养室内的无菌操作程序
第三章 培养用液（2学时） 目的与要求
1、 掌握组织培养用水的标准和各种平衡盐溶液的配制及用途 2、 了解天然培养基的成分及用途
3、 熟悉合成培养基的种类、成分，掌握合成培养基的配制；熟悉无血清培养基的成分及适用范围 4、 熟悉培养基的选择方法
5、掌握消化液、pH值调整液、抗生素液的作用 教学内容
第一节 水和平衡盐溶液 1、水
2、平衡盐溶液（BSS） 第二节 天然培养基 第三节 合成培养基 1、合成培养基的种类 2、合成培养基的成分 3、合成培养液的配制 4、无血清培养基 第四节 培养基的选择 1、经验法 2、实验法 第五节 其它常用液 1、消化液 2、pH值调整液 3、抗生素液
本章重点、难点：合成培养基的配制；无血清培养基的适用范围
第四章 清洗与消毒（1.5学时） 目的与要求
1、掌握清洗的主要目的，玻璃器皿、胶塞、塑料器皿的清洗方法；掌握包装的目的和方法。
2、掌握物理消毒法、化学消毒法、抗生素消毒液（灭菌）的适用范围。
教学内容 第一节 清洗 1、玻璃器皿的清洗 2、胶塞的清洗 3、塑料器皿的清洗 4、包装 第二节 消毒 1、物理消毒法 2、化学消毒法
3、抗生素消毒液（灭菌）
本章重点、难点：玻璃器皿、胶塞的清洗、塑料器皿的清洗方法；包装的方法；物理消毒法、化学消毒法、抗生素消毒液（灭菌）的适用范围。
第五章 基本培养技术（3学时） 目的与要求
1、掌握培养室内的无菌操作、取材及组织的分离、细胞计数法、细胞冻存与复苏、细胞运送。 2、掌握初代培养法、传代培养法 3、了解特殊培养法 教学内容
第一节 组织培养的基本操作和培养技术(1.5学时) 1、培养室内的无菌操作 2、取材及组织的分离 3、细胞计数法 4、细胞冻存与复苏 5、细胞运送
本节重点、难点：培养室内的无菌操作、取材及组织的分离、细胞冻存与复苏、细胞运送。 第二节 常规组织培养法（1学时） 1、初代培养法 2、传代培养法
本节重点、难点：初代培养法
第三节 特殊培养法：单细胞分离（克隆）（0.5学时） 培养本节重点、难点：单细胞分离（克隆）培养方法
第六章 组织污染的检测与排除（1.5学时） 目的与要求
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