3准确度试验浓度应能覆盖整个考虑范围，并且应包含接近定量限的浓度点，一个在浓度范围的中间值，还有校正曲线的最高点。另一种做法是使用关键决定值当作准确度最高的浓度点。ICH关于验证方法的文件中推荐采用覆盖待定范围的最少3个浓度点的最少9次测定进行准确度评价（例如，三个浓度点，每个浓度三次重复测定）。准确度可以报告为样品中已知加入被测成分含量的百分回收率，或平均值与接受的真值之间的偏差，同时包括置信区间。3.4 线性和校正曲线ICH把分析方法的线性定义为在给定范围内通过样品中被分析物的浓度比例直接获得检测结果的能力。线性可以直接用待测物质测定（通过稀释标准贮备液）或分别称取待测品种的各组分后合成混合物。配制5个以上不同浓度的标准溶液（浓度范围在期望浓度的80～，每个进样5～6次，用这些结果计算线性。响应值应与120%之间）被分析物的浓度成直接的比例关系，或通过定义明确的数学计算形成比例关系。用于结果计算的线性回归方程其截距不得明显偏离零点。如果得到一个显著的非零截距，应证明其对方法准确度没有影响。通常用图形化的方式来评价线性，加上一个数学等式，或仅采用等式表示。公式通常表示为用信号高度或峰面积对被分析物浓度的函数作图。有时由于线性的偏离不易检测，可以采用两种其他的作图方式。第一种是用回归线的偏差相对浓度作图，如果浓度范围覆盖不同的数量级，则相对于浓度的对数作图。在线性范围内，这些偏差应均匀分布于正负值之间。203另一种方法是把信号数据除以相应的浓度，产生相对响应值。以相对响应值为y轴，相应的浓度为x轴，按对数比例作图。所得的直线在整个线性范围内应为水平。在较高的浓度水平，通常会与线性呈负偏离。在图上相应的位置（如95%和105%处）画两条平行的水平线，该方法在相对响应线与95%线的交点以上均呈线性。图5比较了两种图形评价法在HPLC法中的应用。25002000?????? [mAU]15001000500043.83.63.43.232.82.52.42.220.1????????0200400600???? [ng/L]8001000???? [mAU]/???? [ng/L]1.05 RcRc0.95 Rc110100???? [ng/L]????????1000图5. HPLC法线性图的图形表示213画出灵敏度（响应值/含量）就能够明确地指示线性范围。对于较宽的线性范围，用含量的对数作图更为合适。Rc表示稳定的响应线。ICH建议用线性曲线的相关系数、y轴截距、回归线斜率和残差平方和来报告准确度。报告中还应包括数据图。另外，分析实际数据与回归线上数据点的偏差也有助于评价线性。一些分析方法，如免疫分析，经过任何转化都不成线性关系。在这种情况下，响应值应表示为样品中被分析物浓度（含量）的合适的函数。为了建立线性关系，建议至少要用5个浓度点。采用其他方法时应证明其合理性。3.5 范围ICH把分析方法的范围定义为样品中被分析物的高浓度/含量到低浓度/含量之间的范围（包括这两个浓度），在此范围内，已证明该分析方法具有合适的精密度、准确度和线性水平。分析方法的范围是已经证明方法的精密度、准确度和线性的高低浓度之间的浓度范围（包括这两种浓度水平在内）。分析方法的范围一般用与检测结果相同的单位表述（例如，百分比、百万分之几）。对于含量测定，ICH要求规定的最小范围是检测浓度的80～120%。它还要求杂质的范围扩展为定量限到每种杂质规定限度的120%，或杂质规定限度的50%到120%。图6为线性和范围定义的图示。223??????????????????>??????LOQLOD??????ǖRSD > 10%, S/N > 20??ǖS/N > 3????图6. 线性和范围的定义3.6 检测限ICH把一个独立分析过程的检测限定义为样品中被分析物能够检出但无需准确定量的最低量。检测限（LOD）是测定值略大于其不确定度的那一点。它是样品中被分析物能被检出的最低量，但不需要准确定量。检测限常常与方法的灵敏度相混淆。分析方法的灵敏度是该方法区分待测成分的浓度或质量的最小差异的能力。实际上，灵敏度是以响应值对被分析物的浓度或质量作图所得校正曲线的斜率。在色谱图中，检测限是峰高为基线噪声的2～3倍时的进样量。除了信噪比法之外，ICH5还规定了另外三种方法。视觉判断：通过测定待测成分浓度已知的样品，并确定该成分能被可靠检出的最低水平来计算检测限。233基于空白的响应值标准偏差：通过分析适当数量的空白样品并计算所得响应值的标准偏差来测量分析背景响应值的大小。基于空白的响应值标准偏差：通过分析适当数量的空白样品并计算所得响应值的标准偏差来测量分析背景响应值的大小。??????????? = 2-3??????????? = 10 - 20????????图7. 通过信噪比评价检测限和定量限3.7 定量限ICH把一个独立分析过程的定量限（LOQ）定义为能够以适当的精密度和准确度对样品中的被分析物进行定量测定的最低量。定量限是对样品基质中低含量化合物进行定量分析的一个参数，也常用于杂质或降解产物的测定。定量限常常通过以下方法确定：对已知被分析物浓度的样品进行分析，并确定该成分能够以可接受的准确度和精密度得到定量分析的最低浓度水平，以此来计算定量限。如果能够确定方法在定量限的精密度要求，则取5～6份被分析物含量递减的样品，进样6次。被分析物的含量范围从测得的已知LOD到LOD的20倍。24
分析方法验证
