蛋白基因产物9.5和泛素在IgA肾病中的表达 基因表达产
物
蛋白基因产物9.5和泛素在IgA肾病中的表达 基因表达产物
【摘要】 目的 观察蛋白基因产物9.5(PGP 9.5)和泛素(ubiquitin)在IgA肾病(IgAN)患者肾组织的表达及其与临床病理的关系,探讨其在IgAN病变的作用。方法 53例IgAN患者分为单纯血尿组(A组)及混合蛋白尿、血尿组(B组)，免疫组织化学和免疫双染色法观察PGP 9.5和泛素在IgAN肾组织中的表达。结果 免疫组织化学显示在IgAN肾组织中，PGP 9.5和泛素均有表达，主要在上皮细胞(壁上皮细胞、特别是小管上皮细胞)及新月体表达。免疫组化双染色显示：泛素分布更广泛，PGP 9.5表达比泛素表达稍强，按Lee氏分级的级别增加逐渐增高，免疫组织化学半定量评分显示增生肥厚病变部位及新月体表达明显强于正常和纤维化/萎缩的部位(P0.05)。
1.2 病理损害分级标准 IgAN肾脏病变损害程度组织学分级采用Lee［1］修改的Meadow组织学分级标准。Ⅰ级：基本正常，偶见轻度系膜增宽伴有或不伴有系膜细胞增多，无肾小管间质损害；Ⅱ级：50%的肾小球有新月体形成，肾小管及间质损害较Ⅳ级更为严重。肾小管、肾间质及血管病变的各项病变参数，采用Katafuchi等［2］的半定量标准。肾小管、肾间质及血管病变积分0~12分，包括间质炎细胞浸润、间质纤维化、肾小管萎缩、血管壁增厚或透明变性；积分评定分别是：无，0分；51%，3分。
1.3 标本处理 全部标本经4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，切4 mm厚切片，常规行PAS、HE、PASE及Masson染色.常规光镜下观察。
1.3.1 免疫组织化学检查 石蜡切片常规脱蜡水化后，10%正常山羊血清封闭。用1：100稀释的多克隆小鼠抗人PGP 9.5抗体(Chemicon公司)，1：100单克隆小鼠抗人泛素抗体(Chemicon公司) 37℃孵育，生物素偶联的羊抗鼠或兔抗羊工作液37℃ 孵育，辣根过氧化物酶偶联的链霉卵白素37℃ 孵育，以 DAB和双氧水室温发色8 min。以PBS液替代一抗为阴性对照。免疫组化双染色按试剂盒进行(Dako公司)。
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1.3.2 肾组织PGP 9.5和泛素免疫组化表达半定量分析方法 根据染色强度分为0~3级，0级为阴性，1级为淡黄色，2级为棕黄色，3级为棕褐色；根据染色面积分为0~3级，0级为无染色，1级染色面积50%。计算强度与面积积分的乘积进行分析表较。
1.4 统计学方法 采用SPSS 11.5软件包进行统计分析，计数资料采用χ?2检验，计量资料采用t检验。P 2.2 不同临床表现患者PGP 9.5和泛素表达的情况：A组(21例)PGP 9.5评分(2.30±0.31)分； Ubiquitin评分(1.90±0.16)分。B组(32例)PGP 9.5评分(3.00±0.22)；Ubiquitin评分(2.80±0.41)分与单纯性血尿患者(A组)相比，混合蛋白尿、血尿患者(B组) PGP 9.5和泛素表达明显增高(与A组比较，P［3］。细胞内蛋白的降解是紧密的调节过程，对于维持细胞内的稳态起重要作用。泛素-蛋白酶体系统是细胞内依赖ATP，非溶酶体途径的蛋白降解通路，通过降解多种胞内蛋白，参与细胞周期、细胞生长、分化与调亡、信号转导、转录调控、免疫应答及抗原呈递等多种生命活动［4］。 本研究发现PGP 9.5和其底物泛素在IgAN肾组织主要表达于上皮细胞，特别是肾小管上皮细胞，包蔓氏囊也有少量表达。这种表达可能与肾小管上皮细胞具有分泌、重吸收、及物质转运有关。本研究还发现在活化的上皮细胞、增生肥厚的小管上皮细胞表达呈强阳性，而相反，在萎缩，损伤的上皮细胞中其表达明显减弱，而且在新月体的表达明显增强。研究发现随着病理改变的加重，Lee分级的增加，虽然PGP 9.5及泛素在小管间质纤维化中的表达减弱，但同时伴随新月体形成增加PGP 9.5及泛素表达明显增加。研究发现PGP 9.5通过控制某些细胞周期素抑制因子的水解，例如周期依赖激酶p27的抑制因子，从而诱导增强细胞的增殖［5-8］，在细胞周期中，细胞周期素(cyclin)和细胞周期素依赖性激酶(C?DKs)是正向调节因子，而CDK抑制因子(CKIs)~lJ起着负向调节作用，CKI可抑制许多不同的CDK复合物，主要抑制周期素E-CDK2和周期素D-CDK4等Gl期复合物，因此会抑制细胞周期中的正向调节因子，使细胞停滞在G?1期，导致细胞肥大，细胞分裂减缓。这与作者的观察结果是一致的。
蛋白尿的多少是IgAN预后的独立危险因素，本研究中，有蛋白尿的患者与单纯血尿患者相比，PGP 9.5及泛素表达显著增强，这提示：PGP 9.5、泛素甚至整个泛素-蛋白酶体系统可能在IgAN病程中对上调增殖起基本作用，并可能在病
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变由细胞活化、增生、肥厚等急性病变向纤维化、萎缩等慢性病变过程中起调节作用。本实验还发现PGP 9.5和泛素在系膜细胞及血管内皮细胞表达阴性，这可能是由于这些细胞的调节是受其他通路控制的，例如MARK通路等［9］。 综上所述，PGP 9.5及泛素可能在IgAN病变及进展中发挥了重要作用，但是其只是在IgAN中起作用还是否在其他肾脏疾病的病变中也起相同的作用，还需进一步观察研究。 参 考 文 献
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蛋白基因产物9
