乙酰肝素酶-2在结肠癌中的表达及其临床意义
曾 超1，宋玉兰2，姚运红1
【摘 要】【摘要】 目的 研究乙酰肝素酶-2(Hpa-2)在结肠癌组织中的表达及其与各临床病理因素的相关性。方法 采用免疫组化检测结肠癌组织和癌旁正常结肠组织中Hpa-2蛋白表达情况。结果 结肠癌组织中Hpa-2蛋白表达阳性率高于癌旁组织，差异具有统计学意义(P＜0.05)。结肠癌临床分期越高，阳性表达率越高；分化程度越高，阳性表达率越低；Hpa-2表达在有淋巴结转移组中明显高于无淋巴结转移组(P均＜0.05)。结论 Hpa-2在结肠癌的进展中起着重要作用，可作为判断大肠癌恶性程度的指标。 【期刊名称】海南医学 【年(卷),期】2012(023)020 【总页数】3
【关键词】【关键词】结肠癌；乙酰肝素酶-2；免疫组化
乙酰肝素酶(Hpa)是一种内源性β-葡萄糖醛酸酯酶，识别并且切割硫酸乙酰肝素蛋白多糖的侧链，硫酸乙酰肝素被切割和降解为10个左右糖单位大小的短链。因此，Hpa不仅可以破坏细胞外基质和基底膜，降低细胞间质屏障功能，还可以促进肿瘤细胞侵入基质和血管壁，从而在肿瘤转移过程中起重要作用[1]。Hpa是目前发现的唯一的作用于细胞外基质多聚糖成分的酶，可以认为它是引起肿瘤转移关键酶，同时也是一个抗肿瘤转移的新靶点。人类Hpa有Hpa-l、Hpa-2两个亚型，目前人们的研究热点都集中在Hpa-l，已经证实Hpa-l高表达与多种恶性肿瘤的侵袭和转移密切相关[2-5]，而对HPa-2的研究报道较少。考虑到人类Hpa-l和Hpa-2的氨基酸序列约有35%的一致性，因此，Hpa-2
可能在恶性肿瘤的进展过程中起重要作用。本实验旨在探讨Hpa-2的表达与结肠癌发生发展的关系，阐明Hpa-2在结肠癌进展过程中的作用，以期寻找结肠癌诊断及治疗的新靶点。
1 资料与方法
1.1 病例资料 收集广东药学院附属第一医院2002年2月至2004年2月的手术存档石蜡标本40例，男性26例，女性14例；年龄48～76岁，中位年龄62岁。所有病例都经病理医生证实为腺癌，其中低分化及未分化腺癌10例，高分化及中分化腺癌30例；有淋巴结转移19例，无淋巴结转移21例；癌组织侵及黏膜及黏膜下层的18例，侵及肌层和浆膜层的22例；TNM分期标准分为Ⅰ/Ⅱ期21例，Ⅲ/Ⅳ期19例。患者术前均未行任何治疗。
1.2 主要试剂 免疫组化染色试剂盒购自迈新生物公司，实验采用S-P免疫组化法，兔抗人多克隆抗体Hpa-2购自Santa Cruz(sc-30123)。实验步骤按试剂盒说明书进行。
1.3 免疫组化染色结果判定 Hpa-2表达阳性染色定位于肿瘤细胞胞浆。以阳性细胞比例和细胞染色强度的乘积判定肿瘤细胞中Hpa-2评分。肿瘤细胞染色强度评分标准：无着色，0分；淡黄色，1分；棕黄色，2分；棕褐色，3分；阳性细胞比例评分标准：阳性细胞数＜6%，6%～24%，25%～49%，50%～74%及≥75%的病例，分别判定评分为0、1、2、3、4。用强度和阳性细胞数的评分的乘积进行最终评分：＜2分为阴性表达，≥2分为阳性表达。
1.4 统计学处理 应用SPSS11.0统计软件分析，对所获得数据进行卡方检验和Fisher确切概率法检测，P＜0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 结肠癌组织与癌旁正常结肠黏膜组织中Hpa-2的表达情况检测 免疫组化分析结果表明：癌旁正常结肠黏膜中Hpa-2蛋白阳性表达率为37.50%(15/40)，在结肠癌组织中Hpa-2蛋白阳性表达率为72.50%(29/40)，两者比较差异有统计学意义(P＜0.05)。Hpa-2在癌旁结肠黏膜组织中表达阳性率低(图1)，Hpa-2在不同分化程度的结肠癌组织中均有阳性表达，其表达主要定位于肿瘤细胞胞浆中(图2～图4)，阳性染色肿瘤细胞呈弥漫性分布于肿瘤间质之中。 2.2 Hpa-2的表达与结肠癌各临床病理因素之间的关系 Hpa-2表达与结肠癌临床病理因素之间的关系详见表1。统计结果表明，Hpa-2表达与肿瘤细胞浸润深度、TNM分期和肿瘤有无淋巴结转移有关(P＜0.05)，而与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度等临床病理因素之间无明显相关性(P＞0.05)。
3 讨论
结肠癌是消化系统最为常见的恶性肿瘤之一。研究表明，随着人民生活水平质量的不断提高，饮食结构发生变化，结肠癌发病率和病死率也呈逐年上升趋势。与大多数其他恶性肿瘤一样，侵袭和转移是结肠癌的重要生物学特征，也是严重影响患者预后的主要因素。研究发现，Hpa-1在肿瘤的侵袭和转移中发挥重要作用，Hpa-1可以破坏、改变基底膜和细胞外基质的结构，从而突破侵袭和转移的屏障，加速肿瘤细胞的侵袭和转移；Hpa-1还可通过调控VEGF的表达，诱导肿瘤血管生成。值得注意的是，作为Hpa家族的另一重要成员[6]，与Hpa-1具有高度同源性的Hpa-2在结肠癌发生发展过程中的作用尚未见报道。 本实验发现Hpa-2蛋白高表达于在结肠癌癌细胞胞浆中，且其阳性表达率明显高于癌旁正常结肠黏膜组织，提示Hpa-2蛋白表达在结肠癌的发生中发挥着重要作用。Hpa-2蛋白在黏膜及黏膜下层中阳性表达率显著低于在肌层和浆膜层
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