牛奶中部分成分的分析
1.实验目的
1.1设计合适的实验方法来分析牛奶中蛋白质与钙的含量
1.2学习利用等电点沉淀法从牛奶中制备酪蛋白
1.3熟悉可见光分光光度计的操作。
1.4加强对沉淀、抽滤、溶液配制等基本操作的锻炼。
1.5掌握双缩脲法测定蛋白质的原理和方法。
1.6掌握配位滴定法测定液体食品中钙含量的原理和方法。
1.7通过与牛奶包装上注明的含量比较，学会对自己实验分析结果进行客观评价。
2. 实验原理
牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g·L-1。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。
双缩脲(NH2CONHCONH2)在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色化合物，称为双缩脲反应，蛋白质分子中含有许多肽键在碱性溶液中也能与Cu2+反应产生紫红色化合物。在一定范围内，其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。因此，可以利用比色法测定蛋白质浓度。双缩脲法是测定蛋白质浓度的常用方法之一。操作简便、迅速、受蛋白质种类性质的影响较小，但灵敏度较差，而且特异性不高。除-CONH-有此反应外，-CONH2、-CH2NH2、-CS-NH2等基团也有此反应。
钙与身体健康息息相关，钙除成骨以支撑身体外，还参与人体的代谢活动，它是细胞的主要阳离子，还是人体最活跃的元素之一，缺钙可导致儿童佝偻病，青少年发育迟缓，孕妇高血压，老年人的骨质疏松症。缺钙还可引起神经病，糖尿病，外伤流血不止等多种过敏性疾病。补钙越来越被人们所重视。牛奶中含有易被人体吸收得钙，有些牛奶产品中还特地加钙而成为钙奶。对于液体牛奶中钙的含量，可采用EDTA法进行直接测定。考虑到牛奶中含有Fe3+、Al3+等干扰离子，可以加入少量三乙醇胺以消除它们的，调节pH≈12～13，以铬蓝黑R作指示剂，指示剂与钙生成红色的络合物，当用EDTA滴定至计量点时，游离出指示剂，溶液呈现蓝色。
3. 实验步骤
3.1 主要原料和仪器
3.1.1材料
新鲜牛奶、加钙牛奶
3.1.2试剂
95%乙醇、无水乙醚、醋酸、醋酸钠、NaOH、CuSO4·5H2O、酒石酸钾、碘化钾、牛血清蛋白（BSA）、EDTA、基准物质CaCO3、HCl、三乙醇胺、钙指示剂
3.1.2.1 0.5 mol·L-1 pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液
先配A液与B液。A液：0.5mol/L醋酸钠溶液。B液：0.5mol/L醋酸溶液。
A液：4.1g醋酸钠，加水至100ml定容；B液：2.85ml醋酸，加水至100ml定容
取A液50mL，B液50mL混合即得pH4.7的HAc-NaAc缓冲液100mL。
3.1.2.2乙醇—乙醚混合液：乙醇:乙醚=1:1（V/V）95%乙醇和乙醚各25ml
3.1.2.3 NaOH（6mol·L-1）：称取24g氢氧化钠溶于100mL水中。
3.1.2.4双缩脲试剂：称取CuS04·5H2O 3.0g，酒石酸钾9.0 g和碘化钾5.0g，分别溶解后混匀，加6 mol·L-1NaOH l00mL，最后加水至1000mL，贮于棕色瓶中，避光，可长期保存。
3.1.2.5 0.9％NaCl（即生理盐水） 1.8g NaCl 200ml水
3.1.2.6蛋白质标准液(10mg·mL-1)，用小烧杯称取干燥的牛血清蛋白100.0mg，以少量生理盐水溶解后倒入l0mL容量瓶中，淋洗小烧杯数次，一并倒入容量瓶中，最后加生理盐水至刻度线。
3.1.2.7待测蛋白样本：将牛奶样品用生理盐水准确配制成一定浓度的溶液后再测定；将制得的酪蛋白用生理盐水准确配制成一定浓度的溶液后再测定。（如若不能溶解，滴加几滴6mol·L-1 NaOH溶液、分别用l0mL容量瓶定容），量取30.00ml纯牛奶，倒入100ml容量瓶中，定容。
3.1.2.8 EDTA(0.01mol·L-1)：称取2.0g EDTA二钠盐，用温热水溶解后，稀释至500mL，储存于聚乙烯塑料瓶中。
3.1.2.9 CaCO3标准溶液(0.01 mol·L-1)：准确称取基准物质CaCO3 0.1g左右，先以少量水润湿，再逐滴小心加入6 mol·L-1HCl，至CaCO3完全溶解，定量转入100mL容量瓶中，以水稀释至刻度，并计算其浓度。
3.1.2.10 NaOH（5 mol·L-1） 20g NaOH 100ml 水
3.1.2.11 HCl（6 mol·L-1） 50ml 浓盐酸（12mol/L）50ml水
3.1.2.12 三乙醇胺(200g·L-1) 20g 三乙醇胺 100ml水
牛奶中部分成分的分析
