四君子汤联合缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤大鼠炎症
因子及氧化应激的影响
华 晨 傅天啸 傅永清 周 剑 兰 菲 任大为
【摘 要】目的观察四君子汤联合缺血预处理（IPC）对肝脏缺血再灌注损伤大鼠炎症因子及氧化应激的影响。方法80只SD大鼠随机分成空白对照组、四君子汤预处理组、IPC组和四君子汤预处理+IPC组，每组20只。肝脏缺血再灌注术后检测白细胞计数（WBC）、血小板计数（PLT）；血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酸氨基转移酶（ALT）；血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6），以及肝组织中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。结果四君子汤预处理+IPC组WBC、ALT及AST水平显著低于其余三组（P＜0.05）。四君子汤预处理组与IPC组的ALT、AST水平较空白对照组显著降低（P＜0.05）。四君子汤预处理+IPC组TNF-α水平显著低于其余三组（P＜0.05）。三个实验组IL-6、MDA水平显著低于空白对照组（P＜0.05），SOD水平显著高于空白对照组（P＜0.05）。各实验组间比较，四君子汤预处理+IPC组SOD水平高于其余两组（P＜0.05）。结论四君子汤联合IPC可减轻大鼠肝脏缺血再灌注过氧化损伤，抑制炎症因子，保护肝功能。 【期刊名称】浙江中西医结合杂志 【年(卷),期】2014(000)005 【总页数】4
【关键词】大鼠；肝脏缺血再灌注损伤；四君子汤；缺血预处理；肿瘤坏死因子α；白介素6；丙二醛；超氧化物歧化酶
肝脏缺血再灌注损伤（hepatic ischemia reperfusion injury，HIRI）是导致
肝胆外科患者术后肝功能衰竭甚至死亡的主要原因，当前无治疗HIRI的有效方法[1]。HIRI发生机制复杂，目前认为氧化损伤、炎症反应是其病理生理机制的重要环节。近年来，针对发病机制的各种临床预处理措施成为国内外研究的热点。中药预处理具有靶点广、副作用小等特点。本研究联合中药四君子汤及缺血预处理（ischemia preconditioning，IPC）作为干预手段，观察其在大鼠HIRI过程中保护肝功能、减轻过氧化损伤、抑制炎症反应的作用及机制。
1 实验材料
1.1动 物 健康雄性SD大鼠80只，7周龄，平均体质量（220±40）g。由浙江中医药大学动物实验研究中心提供，动物许可证号：SYXK（浙）2008-0115。 1.2药 品 3%戊巴比妥钠；四君子汤药物组成：人参12g，茯苓、白术各9g，炙甘草6g（中药饮片购自浙江省中医院），水煎煮2次，合并滤液浓缩至生药含量为1g/mL，冰箱冷藏备用（实验所用剂量均以生药计）。
1.3主要仪器及试剂 动物手术器械、移液器、天平、DU800分光光度仪、组织匀浆机、恒温水浴箱、脱色摇床等均由浙江中医药大学动物实验研究中心提供。肿瘤坏死因子α（TNF-α）试剂盒、白介素6（IL-6）试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
2 实验方法
2.1分组及造模 80只大鼠随机分为空白对照组、四君子汤预处理组、IPC组和四君子汤预处理+IPC组，每组20只。大鼠肝脏缺血再灌注模型按Nauta等方法制备。3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（0.13mL/ 100g），取上腹部正中切口进腹，显露第一肝门部，用无损伤血管夹将门静脉和肝动脉分支夹闭，阻断入肝血流45min后，取下血管夹恢复肝脏供血。
2.2干预方法 空白对照组：缺血再灌注造模前予生理盐水灌胃5天，1次2mL，1天1次；四君子汤预处理组：缺血再灌注造模前予四君子汤灌胃5天，1次2mL，1天1次；IPC组：缺血再灌注前予缺血预处理，方法为在持续阻断肝血流前用无损伤血管钳夹闭肝脏左、中叶肝蒂10min，松开血管钳，使肝脏再灌注10min；四君子汤预处理+IPC组：缺血再灌注造模前予四君子汤灌胃，缺血预处理，方法同上。各组术后予常规补液治疗。
持续性缺血再灌注术后24h采集标本。3%戊巴比妥钠溶液麻醉（0.13mL/100g），5mL注射用针筒自大鼠心脏取血，剪取肝脏组织约10g左右，待检。
2.3检测指标 ①白细胞计数（WBC）、血小板计数（PLT）：取全血，采用血细胞计数仪检测。②ALT、AST检测：血液样本3000r/min离心10min分离取血清，用全自动生化分析仪检测AST、ALT水平。③血清TNF-α和IL-6含量测定：采用ELISA法测定，具体步骤按试剂盒进行。④肝组织中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的测定：采用硫代巴比妥酸法测定各组肝组织中的MDA，羟胺法检测SOD，按试剂盒说明进行。肝脏组织加9倍量的匀浆液，用匀浆机匀浆（操作在冰水浴中进行），制成10%匀浆液，3000r/min离心10min，取上清液。MDA含量测定：MDA可与硫代巴比妥酸缩合，形成红色产物，测吸光度值。SOD测定：通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基，后者氧化胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，测其吸光度。
2.4统计学方法 所有计量资料用均数±标准差（） 表示，采用方差分析。使用SPSS20.0软件包分析数据，以P＜0.05差异有统计学意义。
四君子汤联合缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤大鼠炎症因子及氧化
