绿色荧光蛋白GFP在转化细胞和肿瘤细胞中的表达

绿色荧光蛋白GFP在转化细胞和肿瘤细胞中的表达

于丽莉;陈诗书

【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》 【年(卷),期】2000(020)005

【摘要】目的 在肿瘤基因治疗研究中建立一个用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)为标记基因的合适条件。方法 用带有GFP突变体的质粒转染到表达细胞，观察GFP瞬时表达的情况：1．直接测定GFP在COS-7细胞中的表达并观察表达的稳定性；2．比较不同启动子驱动的pcDNAa-EGFP和pSVKa-S65T两种质粒在不同肿瘤细胞中的转染效率；3．用LacZ基因与GFP基因共转染48h后，通过FACS分选测定两种基因在同一细胞中的表达情况。结果 在不同条件下的活细胞中有GFP基因表达，且表达具有稳定性，表达持续约2周左右；CMV启动子和SV40启动子调控的GFP对不同肿瘤细胞株的转染效率有差异。当两种基因共转染后用FACS分选，选出GFP细胞带有LacZ基因细胞在1：4时可达85％以上。结论 通过GFP表达可连续而直接地观察活细胞中的基因表达，利用GFP可快速地挑选带有靶基因的细胞。%Objective To search the appropriate experimental conditions for using green fluores-cent protein (GFP) as a reporter gene in tumor gene therapy. Methods The plasmids carrying mu-tated GFP gene were transfected into the eukaryotic cells to observe transient gene expression. Thesestudies were conducted to 1. directly determine GFP expression and express stability in the COS- 7cells, 2. compare the transfection efficiency of two plasmids pcDNA3 - EGFP, pSVKa - S65T

with dif-ferent promoters in different tumor cell lines, 3. determine two genes expression in a single cell usingLacZ cotransfected with GFP by FACS. Results Fluorescence could be detected in intact viable cellsunder different sets of conditions. The expression of GFP might last two weeks or more and the ex-pressed fluorescence was stable. The transfection rate of pcDNA3 - EGFP expressed was different inthree tumor cell lines examined. But pSVK3 - GFP expressed similarly in four tumor cell lines exam-ined. FACS showed the probability of two genes entering a single cell is above >85% at the ratio 1:4.Conclusion The above data indicate that the GFP can be visualized continuously and directly for geneexpression in living cells. GFP may also be used for quicklly selecting cells carrying a target gene. 【总页数】4页(408-411)

【关键词】GFP表达 标记基因 肿瘤基因治疗 【作者】于丽莉;陈诗书

【作者单位】上海第二医科大学生物化学教研室人类基因治疗研究中心，上海 200025;上海第二医科大学生物化学教研室人类基因治疗研究中心，上海 200025

【正文语种】中文 【中图分类】R73 【文献来源】

https://www.zhangqiaokeyan.com/academic-journal-cn_journal-

shanghai-jiaotong-university-medical-science_thesis/0201246028518.html 【相关文献】

1.表达绿色荧光蛋白的单纯疱疹病毒检测循环肿瘤细胞 [J], 韩香萍; 施桂兰; 王成锋; 李洁; 张建伟; 张郁; 张叔人; 刘滨磊

2.小干扰RNA特异性抑制肺肿瘤细胞A549中绿色荧光蛋白基因表达 [J], 赵亚力; 韩为东; 宋海静; 李琦; 马学斌; 郝好杰

3.绿色荧光蛋白和HCV 5′NCR调控荧光素酶双顺反子真核表达载体的构建及其在肝细胞中的表达 [J], 刘水平; 谭德明; 侯周华; 刘双虎

4.原钙黏蛋白7b与绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建及其在MCF10A细胞中的表达定位 [J], 陈昂; 袁龙; 张峥嵘; 梁剑青; 闫敏; 李世崇; 王启伟; 孙强; 刘真真

5.以红色及绿色荧光蛋白为标记基因的血管内皮生长因子165和骨形态发生蛋白2真核表达载体的构建及其在293-T细胞中的共表达 [J], 邹海波; 安洪; 蒋电明

以上内容为文献基本信息，获取文献全文请下载