pｃr技术发展与展望
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PＣＲ技术的发展及展望
摘要:PCR技术是遗传与分子生物学分析的根本性基石,近年来.基于常规PCR技术开发出了许多新的用途。综述了ＰCＲ技术的主要扩展。
关键词：PCR技术
１971年Kｈorａna等最早提出ＰCR理论:“DＮＡ变性解链后与相应引物杂交，用DNＡ聚合酶延伸引物，重复该过程便可克隆ｔRNA基因”。因当时基因序列分析方法尚未成熟、热稳定DNＡ聚合酶还未发现及寡聚核苷酸引物合成仍处于手工和半自动阶段，核酸体外扩增设想似乎不切实际,且Smith等已发现了DＮA限制性内切酶，使体外克隆基因成为可能，Kｈorａna等的早期设想被忽视。１98５年Mullｉs等用大肠杆菌DNA聚合酶工Ｋlenow片段体外扩增哺乳动物单拷贝基因成功以及19８８年Ｓaikｉ等将耐热ＤNA聚合酶（Taq酶)引入PCR,使扩增反应的特异性和效率大大提高,并简化了操作程序，最终实现了DＮA扩增的自动化，迅速推动了PCR的应用和普及。
PCR(Poｌymｅrase Ｃhain Reacｔiｏn)即聚合酶链式反应，是指在DＮA聚合酶催化下。以母链DＮA为模板,以特定引物为延伸起点。通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNＡ互补的子链DNA的过程。现已被广泛应用于农学、植物病理学等领域的研究。最初的PCＲ技术相当不成熟，但在随后的几十年里,ＰCR技术被不断改进。它从一种定性的分析方法发展到定量测定；从原先只能扩增几个kb的基因到目前已能扩增长达几十个kb的DNA片断[1]。到目前为止,PCＲ技术已有十几种之多。本文对其近年来的主要扩展及应用进行综述。
1 .PCR技术的扩展
1．1 AP-PCＲ技术
1．1．1 AP-PＣR技术的定义、来源及特点
ＡP-PCR(Arbｉtraｒily priｍed PCR）技术[2],是指在对所扩增基因顺序一无所知的情况下.主观上随意地设计或选择一个非特异引物进行ＰCＲ扩增，反应在不严格条件下扩增l至数轮后,再于严格条件下进行。通过比较扩增产物的指纹图,即可反映出待分析基因组的特征。AP-ＰCＲ技术由Wilｌiａms等[]于2０世纪90年代建立.它可以快速地从两个或更多的个体组织细胞中分离出差异基因或基因差异表达产物，具有简单、灵敏、有效和重复性好等特点。
１.1.2 ＡP－PＣR技术的应用
ＡＰ-PＣR技术是常规ＰCＲ技术在差异基因分离方面的扩展,主要应用在：(1)差异基因的分离,Liaｎg和Paｒdee2]应用AＰ-PCＲ技术对正常A31和肿瘤起源的BPＡ31细胞进行了鉴定,并分离得到了仅存在于正常细胞的N1及仅存在于肿瘤细胞的T1片段；(２)菌株鉴定，杨国玲等[3]采用AP-ＰCＲ技术对甲真菌病病原菌进行了快速鉴定;（3)遗传作图,Weｌｓh等[2]成功地应用AP-PＣR方法快速鉴定了重组鼠(Ｃ56BＬ／6J×DBＡ/2J)扩增多态性在染色体图谱中位置。
1．2 LP-PＣR和彩色PCR
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pcr专业技术发展与展望
