生物化学与分子生物学
实 验 指 导 书
天津理工大学
环境科学与安全工程学院
2006.7
生物化学与分子生物学实验
目录
实验一 蛋白质的变性凝固及沉淀反应 ......................................................... 3 实验二 脲酶Km值简易测定 ........................................................................ 4 实验三 谷物种子中赖氨酸含量测定 ............................................................. 7 实验四 实验五 实验六 实验七 实验八 实验九 蛋白质的颜色反应（米伦氏反应） ................................................. 9 蛋白质含量测定（双缩脲法） ....................................................... 10 酶动力学因子对酶活力的影响（综合实验） ............................... 12 碱裂解法制备质粒DNA ................................................................ 15 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA ............................................ 17 紫外吸收检测DNA的浓度和纯度 ............................................... 19
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生物化学与分子生物学实验
实验一 蛋白质的变性凝固及沉淀反应
一、目的要求
1 熟悉蛋白质的沉淀反应。
2 进一步掌握蛋白质的有关性质。
二、基本原理
蛋白质受热作用后，其分子内部结构发生变化，常使疏水基暴露于表面，因而失去原有的亲水性质，成为溶解度很低的变性蛋白。蛋白质在其等电点或等电点附近受热作用，则凝固而沉淀。若在稀酸稀碱中加热，由于变性蛋白质带正电荷或负电荷，故不易析出，此时如调节到等电点或等电点附近则沉淀析出，称为结絮。结絮的变性蛋白尚可溶于稀酸或稀碱中。结絮蛋白继续加热，则成较大的块状凝固蛋白，些时即不再溶于稀酸或稀碱中。
蛋白质由于水化层和电荷的存在，因此其水溶液具有亲水胶体的性质。凡能破坏蛋白质水化层和电荷存在的因素，均可使蛋白质从溶液中沉淀出来，这种蛋白质由溶液中析出的现象称为蛋白质的沉淀反应。大多数蛋白质经盐析反应，或在低温下用乙醇或丙酮短时间作用使蛋白质沉淀后，除去上述因素，蛋白质又能溶于原来的溶液中，属于可逆的沉淀反应。但用重金属盐类、生物碱试剂、加酸及加热引起的蛋白质沉淀反应一般均属于不可逆沉淀反应。
三、主要器材、试剂和药品
酒精灯、试管、移液管、胶头滴管、木试管夹、鲜鸡蛋、HCl、NaOH、硫酸铵、硫酸铜、丙酮等。
四、操作步骤
1、 20%蛋白液2ml+1mol/LHCl 2ml 2、 20%蛋白液2ml+1mol/LNaOH 2ml
3、 20%蛋白液2ml+蒸馏水2 ml,置于酒精灯外焰上加热 4、 20%蛋白液2ml，逐渐加入硫酸铵粉末 5、 20%蛋白液2ml加入少许硫酸铜 6、 20%蛋白液2ml加入丙酮10滴
五、实验报告
分别描述上述6个步骤的现象并解释其原因。
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生物化学与分子生物学2024
