IL-17RA基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定
吴振华;何丹;王洪江
【期刊名称】《新疆医学》 【年(卷),期】2018(048)009
【摘要】目的 构建白介素17受体A(IL-17RA)基因过表达慢病毒载体.方法 采用聚合酶链反应(PCR)扩增制备IL-17RA cDNA;将IL-17RA cDNA连接于用Age1酶切消化获得的线性化GV358载体;对PCR法鉴定为阳性克隆的IL-17RA-GV358载体进行测序;将IL-17RA-GV 358载体用pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染到293T细胞获得IL-17RA慢病毒包装,运用荧光法行滴度检测;用IL-17RA-GV358重组慢病毒转染293T细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,运用RT-PCR、Western blot检测IL-17RA mRNA及蛋白的表达.结果 IL-17RA-GV358重组慢病毒转染293T细胞后可观察到荧光,结果显示在稳定转染的细胞中IL-17RA mRNA及蛋白的表达水平较未转染细胞显著增高.结论 成功构建IL-17RA-GV358慢病毒载体,为IL-17RA基因的后期研究提供了实验基础.
【总页数】5页(942-945,925)
【关键词】白介素-17受体A;慢病毒;载体构建;过表达 【作者】吴振华;何丹;王洪江
【作者单位】新疆医科大学附属肿瘤医院胸外科,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学附属肿瘤医院胸外科,新疆乌鲁木齐830011;新疆医科大学附属肿瘤医院胸外科,新疆乌鲁木齐830011 【正文语种】中文
【中图分类】R392.12;R734.2 【相关文献】
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