Del-1对特异性过敏患儿嗜酸性粒细胞表面ICAM-1表达
的影响
阎 淑， 张 泓
【摘 要】摘要：目的 研究发育内皮基因1（Del-1）对特异性过敏患儿嗜酸性粒细胞上细胞间黏附分子1（ICAM-1）表达的影响，并初步探讨其意义。方法 收集35例特异性过敏患儿外周血标本，利用磁珠分选（MACS）方法分选嗜酸性粒细胞，用Del-1、抗Del-1抗体或白细胞介素17（IL-17）处理，用逆转录聚合酶链反应（PCR）检测ICAM-1的表达，并进行统计学分析。结果 与对照组比较，Del-1处理组ICAM-1表达水平下降（P＜0.05），抗Del-1抗体处理组ICAM-1表达水平上升（P＜0.05）；Del-1与IL-17共同处理组ICAM-1表达水平较单独IL-17处理组下降（P＜0.05）；但在非嗜酸性粒细胞中，Del-1或抗Del-1抗体处理组ICAM-1表达水平较对照组[用磷酸盐缓冲液（PBS）处理]差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 Del-1可调节嗜酸性粒细胞表面的ICAM-1表达，提示Del-1可能通过抑制嗜酸性粒细胞的黏附作用抑制特异性过敏炎症。
【期刊名称】检验医学 【年(卷),期】2018(033)001 【总页数】5
【关键词】发育内皮基因1；细胞间黏附分子1；白细胞介素17；特异性过敏 特异性过敏是儿科常见的变态反应性疾病，可严重影响患儿的生活和学习质量，其重要特征是特异性IgE增加及嗜酸性粒细胞浸润[1]。炎症部位嗜酸性粒细胞增多与嗜酸性粒细胞和内皮细胞之间的黏附密切相关。细胞间黏附分子1
（intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1）是一种重要的黏附分子，其受体为淋巴细胞功能抗原（lymphocyte function-associated antigen-1，LFA-1）。当ICAM-1与LFA-1结合后可使白细胞与内皮细胞之间形成牢固结合，从而趋化白细胞到炎症局部。在特异性过敏性炎症中， ICAM-1可趋化嗜酸性粒细胞到炎症部位[2]。此外，有研究还表明，在炎症性疾病中，白细胞介素17（interleukin 17，IL-17）可诱导ICAM-1的表达，促进炎症细胞趋化到炎症部位从而加重炎症[3]。
发育内皮基因1（developmental endothelial locus-1，Del-1）是组织内血管内皮细胞合成的糖蛋白，由Edil3基因编码。Del-1是一种功能强大的内源性免疫负调控因子，可与LFA-1结合抑制ICAM-1介导的炎症细胞黏附。最近有研究报道，Del-1参与了IL-17的炎症调控，表现为正常牙周组织中Del-1拮抗IL-17的产生及抑制炎症反应[4]。但在特异性过敏中，Del-1对ICAM-1介导的细胞间黏附的作用尚不清楚。我们的前期研究发现，在特异性过敏中，当嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（eosinophil cationic protein，ECP）表达上升时，Del-1表达下降，提示在特异性过敏中Del-1可能与嗜酸性粒细胞相关[5]。为此，本研究拟通过分析Del-1对嗜酸性粒细胞上趋化因子ICAM-1表达的影响，探讨Del-1在特异性过敏中发挥作用的可能机制。
1 材料和方法
1.1 研究对象
选取上海交通大学附属儿童医院2015年11月—2016年4月特异性过敏患儿35例，其中男16例、女19例，年龄6～10岁，所有患儿血清中特异性IgE（包括吸入性过敏原和食物性过敏原）等级≥4级。这些患儿无除过敏以外的急、
慢性疾病， 2周内无激素使用史。 1.2 方法
1.2.1 磁珠分选（magnetic-activated cell sorting，MACS） 采集患儿室温（20～25 ℃）肝素抗凝静脉血10 mL，立即采用嗜酸性粒细胞分选试剂盒（德国美天旎公司）分选嗜酸性粒细胞。步骤为：将10 mL血清用1×磷酸盐缓冲液（phosphate-buffered saline，PBS）按1∶1稀释，沿管壁缓慢叠加于20 mL淋巴细胞分离液（天津美德太平洋公司）液面上，20 ℃ 600×g离心30 min，保留最下面红细胞和粒细胞层，用50 mL 1×红细胞裂解液悬浮细胞，常温孵育10 min，20 ℃以300×g离心8 min，用冰缓冲液（pH值 7.2，1×PBS， 0.5 %牛血清白蛋白，2 mmol/L 乙二胺四乙酸）洗2次，得到富含嗜酸性粒细胞的粒细胞群，调细胞浓度至1×107/mL。以300×g离心10 min，弃上清，每1×107个细胞加入缓冲液40 μL，生物素标记的复合抗体（CD2、CD14、CD16、CD19、CD56、CD123 和 CD235a）10 μL， 充分混匀后4 ～ 8 ℃孵育10 min；每1×107个细胞再分别加入缓冲液30 μL、包被于磁珠表面的第二抗体（抗生物素抗体）20 μL，充分混匀后4～8 ℃孵育15 min；加入2 mL缓冲液，以300×g离心10 min，弃上清，加入缓冲液500 μL重悬细胞；以3 mL缓冲液冲洗MS分选柱，使细胞悬液通过MS分选柱，收集从MS分选柱中流出的细胞，即为纯化的嗜酸性粒细胞（阴性分选）；将MS分选柱撤离磁场后以缓冲液冲洗，流出的细胞悬液即为除嗜酸性粒细胞以外的粒细胞（非嗜酸性粒细胞）。嗜酸性粒细胞纯度用FACS Calibur流式细胞仪（美国BD公司）分析鉴定。用台盼蓝染色细胞，细胞存活率达到99%以上。 1.2.2 Del-1处理及细胞培养 将上述方法中得到的细胞悬液调到1×106/mL，
Del-1对特异性过敏患儿嗜酸性粒细胞表面ICAM-1表达的影响
