重要药用植物印度獐牙菜主要成分的定量分析
1.前言
印度獐牙菜是一种重要的药用植物，在印度的喜马拉雅地区尼泊尔和不丹一带生长。印度獐牙菜被发现生长在1200-3000米高度之间的温带森林潮湿的山坡上，可以在它的野生生长地任意的采摘用于贸易和本地生产使用。它被广泛应用在东方传统药物如印度草药学和尤纳尼医学，也是中国传统藏药以及在尼泊尔局部应用。尼泊尔是印度药用原料植物的主要供应商之一，（1）尼泊尔是印度原料药用植物的主要供应商之一，印度獐牙菜是最重要的出口药用植物，在尼泊尔药用植物出口中排名前5，几乎占尼泊尔总药用植物的贸易的5 0%（2）印度獐牙菜有很多药用用途，其中最著名的是抗糖尿病，抗疟疾，血液净化和肝的保护性能。也可用于中药，可治疗慢性发热，疟疾，贫血，支气管哮喘，肝脏疾病，肝炎，胃炎，消化不良，便秘，皮肤病，寄生虫，癫痫，溃疡，尿少，高血压，抑郁症和某些类型的精神紊乱，分泌胆汁，血液净化和糖尿病（3-8）。在印度草医学的记载中，印度獐牙菜味苦，凉性药物，可促进消化，治疗咳嗽。（9）是许多草药保健品、营养补充品的重要原料，还可用于制成抗糖尿病和抗肿瘤制剂、肝脏滋补品、护肤品、肥皂、甚至发油。首次被介绍是在1839版的爱丁堡药典上，据报告在英国和美国药典被用作输液或酊剂。
在尼泊尔，印度獐牙菜用于本地治疗糖尿病，高血压，慢性疟疾，发烧和驱虫剂。印度獐牙菜属龙胆科植物，含有的许多苦味素可以影
响它的治疗特性如苦杏仁苷苦，环烯醚萜苷是已知最苦的化合物（10）。印度獐牙菜也富含黄酮类化合物，萜类化合物，酮，环烯醚萜类和环烯醚萜苷（11）。在尼泊尔当地，印度獐牙菜通过研磨并泡入水中一整夜的方法制成可输入身体的液体。直到现在都还没有比较野生和栽培植物印度獐牙菜的报告。在印度獐牙菜不同部位之间潜在的化学成分变化的知识缺乏。尽管全部的印度獐牙菜都在被交易，任有一部分药用植物的相互矛盾的信息最有效。因此本研究的目的是分析从尼泊尔不同地区收集的印度獐牙菜在不同的植物部分在水和12%乙醇中制备，，这些化学物质可能存在的差异（茎，根和花序和叶片的混合物）。本研究旨在探讨在水和12%乙醇中野生和栽培印度獐牙菜提取物之间可能存在的差异。
2 材料和方法 2.1试剂
购自美国加州ChromaDex TM公司的标准的芒果苷，獐牙菜苦苷、苦杏仁苷，从新泽西州费希尔公司购买磷酸及高效液相色谱法测定甲醇。
2.2 植物样品
所有的印度獐牙菜植物都从尼泊尔具有代表性九个地区采集，尼泊尔东部：塔普勒琼，丹库塔和潘切塔，尼泊尔中部：拉苏瓦，多拉卡和新图巴尔恰克，尼泊尔西部：多尔帕，巴朱拉和木谷（图1）。野生和栽培的印度獐牙菜植物在尼泊尔东部三个地区被采集：丹库
塔，泰拉图姆和桑库瓦萨巴（图1）。在2007年八月底至十月时，花谢的季节所有的植物都将开始采集一直到植物长出种子的阶段。 2.3 方法 2.3.1 样品提取
样本分别为在20-25oC.室温干阴凉燥下印度獐牙菜的根，茎和花序与叶的混合，这些不同的植物部分用咖啡研磨机研磨。在水或12%植物乙醇提取中，1g的干燥植物样品混合与100毫升,将混合物置于室温下（25oC）12小时（过夜），第二天将样品用滤纸过滤。 2.3.2 高效液相色谱分析树脂酚醛概况
取2ml提取物用0.2μM滤波器和5μL滤波器过滤后注入在配有自动进样器的安捷伦1100系列的高效液相色谱器和DAD 1100二极管阵列检测器（安捷伦科技公司，帕洛阿尔托，CA）。
取溶剂（A）10毫米磷酸（pH 2.5）和（B）甲醇100%用于梯度淋洗。前8 min甲醇浓度增加到60%，在接下来的7分钟浓度增加到100%，然后在接下来的3分钟下降至0%，并在此浓度下维持7分钟（总运行时间为25分钟）。
分析柱采用250毫米×4.6毫米内径在1毫升/分钟的流速下包装5μ颗粒大小的材料的安捷伦ZORBAX色谱柱-SB-C18，记录每个运行在225 nm和306 nm处的吸光度，使用安捷伦化学工作站增强积分器综合色谱图。通过注射不同浓度的苦杏仁苷、芒果苷、獐牙菜苦苷的来校准仪器，在标准下通过比较不同时间的二极管阵列的光谱特征鉴别峰谱，使用标准曲线和样品干重计算的植物化学物质的量。
2.4 统计分析
统计分析采用单向方差分析完成。事后比较采用LSD检验或统计软件包版本5做（美国塔尔萨StatSoft公司）（P<0.05）。 3 结果与讨论
三个主要成分：芒果苷，苦杏仁苷和獐牙菜苦苷和各自的衍生物在水和12%的植物乙醇提取物中的鉴定（图2，3，4和5）。 3.1芒果苷及其衍生物
图6显示了从尼泊尔九个不同地区采集来的印度獐牙菜不同部位在水溶液和12%乙醇提取物提取中中芒果苷及其衍生物存在量的变化。发现在水和12%植物乙醇提取物提取、中，采集的所有印度獐牙菜植物样品中花序和叶片的混合物的的芒果苷及其衍生物的含量最高，茎部的芒果苷及其衍生物的含量比根部高，从拉苏瓦采集的印度獐牙菜的花序和叶片的混合物（样品干重0.46mg/g和0.4mg/g）的芒果苷及其衍生物的量最高，从多拉卡采集的印度獐牙菜的根部（样品干重0.003mg/g和0.001mg/g）芒果苷及其衍生物的量最低，从尼泊尔东部、西部和中部地区（P＜0.05）采集的印度獐牙菜的不同部位含芒果苷及其衍生物的量没有呈现显著差异。虽然没有显著差异（P＜0.05），但是栽培植物样品的含芒果苷及其衍生物的量比较野生植物样品的提取物略高（图7）。
芒果苷，氧杂蒽酮C-葡萄糖苷(L-C-β-D吡喃葡萄糖-1-3,6,7-四羟基蒽氧杂蒽), 发现于药用植物芒果（芒果树），据报道这种植物的叶子具有良好的降血糖作用（12）。在印度，芒果叶和树皮提取物
被用于免疫缺乏疾病的治疗治疗如关节炎，糖尿病，肝炎，心和精神障碍（13）。除了具有抗氧化（13），还具有抗肿瘤（14）、抗病毒（15）、抗动脉粥样硬化（12）、免疫调节（14）、抗增殖、强心利尿（16）的特性，它也被报道具有较高的通过刺激胰腺生产胰岛素从胰腺外作用的抗糖尿病活性和增强糖酵解酶的活性的临床药物格列本脲(17)。芒果苷具有明显的心脏保护和降血脂作用（18）。据报道芒果苷也具有明显的对糖尿病血脂的抑制作用（19）。
在尼泊尔本地印度獐牙菜作为一种抗糖尿病输入人体。文献表明，芒果苷似乎有其众多的抗糖尿病及并发症的作用模式，可直接刺激胰岛素的分泌，增强糖酵解酶，抑制α-葡萄糖苷酶和其他酶如麦芽糖酶，蔗糖酶，异麦芽糖酶和醛糖还原酶（20），也可间接通过其抗氧化能力（21）抗炎镇痛（22）、抗动脉粥样硬化（12），保护心脏和抗高血脂的特性（18）。 3.2獐牙菜苦苷及其衍生物
一般来说，在水和12%植物乙醇提取物提取中，采集的所有印度獐牙菜植物样品中花序和叶片的混合物含獐牙菜苦苷及其衍生物的量最高（图8），并发现根的獐牙菜苦苷及其衍生物含量比所有干植物样本的含量高。此外，在12%乙醇提取中采集的所有印度獐牙菜植物样品中含獐牙菜苦苷及其衍生物的量比在水中的含量高。在水和12%植物乙醇提取物提取中，从尼泊尔东部、西部和中部地区（P＜0.05）采集的印度獐牙菜的不同部位含獐牙菜苦苷及其衍生物的量没有呈现显著差异，而从新图巴尔恰克采集的印度獐牙菜植物样品中花
重要药用植物印度獐牙菜主要成分的定量分析
