高效液相谱仪原理色
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高效液相色谱法是在经典色谱法的
基础上，引用了气相色谱的理论，在技
术上，流动相改为高压输送（最高输送
压力可达4.9′107Pa）；色谱柱是以特 殊的方法用小粒径的填料填充而成，从
而使柱效大大高于经典液相色谱（每米
塔板数可达几万或几十万） ； 同时柱后连
有高灵敏度的检测器，可对流出物进行
连续检测。
一、高效液相色谱仪有哪些特点？ 1． 高压：液相色谱法以液体为流 动相（称为载液）， 液体流经色谱柱， 受
到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，
必须对载液施加高压。一般可达 150～350 × 105Pa。
2．高速：流动相在柱内的流速较经 典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。
高效液相色谱法所需的分析时间较之经
典液相色谱法少得多，一般少于1h 。
3．高效：近年来研究出许多新型固 定相，使分离效率大大提高。 4．高灵敏度：高效液相色谱已广泛 采用高灵敏度的检测器，进一步提高了
分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可
达10-11g。另外，用样量小，一般几个 微升。
5．适应范围宽：气相色谱法与高效 液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有
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分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操
作方便等优点， 但是受技术条件的限制，
沸点太高的物质或热稳定性差的物质都
难于应用气相色谱法进行分析。而高效
液相色谱法只要求试样能制成溶液，而
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不需要汽化，因此不受试样挥发性的限
制。对于高沸点、热稳定性差、相对分
子量大（大于400 以上）的有机物（这
些物质几乎占有机物总数的 75% ～ 80%
）原则上都可应用高效液相色谱法来
行分离、分析。据统计，在已知化合物
中，能用气相色谱分析的约占20%，而
能用液相色谱分析的约占70%～80%。
二、高效液相色谱法可分为哪 几种主要类型？各自的分离原 理是什么？
高效液相色谱按其固定相的性质可 分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色
谱、反相高效液相色谱、高效离子交换
液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效
聚焦液相色谱等类型。用不同类型的高
效液相色谱分离或分析各种化合物的原
理基本上与相对应的普通液相层析的
进
原
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理相似。其不同之处是高效液相色谱灵
敏、快速、分辨率高、重复性好，且须
在色谱仪中进行。
根据分离机制的不同，高效液相色 谱法可分为下述几种主要类型： 1．液—液分配色谱法及化学键合 相色谱法
流动相和固定相都是液体。流动相 与固定相之间应互不相溶 （极性不同， 避
免固定液流失），有一个明显的分界面。
当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行 分配。
a．正相液—液分配色谱法：流动相 的极性小于固定液的极性。 b．反相液—液分配色谱法：流动相 的极性大于固定液的极性。 c．液—液分配色谱法的缺点：尽管
流动相与固定相的极性要求完全不同，
但固定液在流动相中仍有微量溶解；流
动相通过色谱柱时的机械冲击力，会造
成固定液流失。上世纪70年代末发展的
化学键合固定相，可克服上述缺点，现
在应用很广泛（70%～80%）。 2．液—固色谱法
流动相为液体，固定相为吸附剂 （如硅胶、氧化铝等）。这是根据物质吸
附作用的不同来进行分离的。其作用机
制是：当试样进入色谱柱时，溶质分子
(X) 和溶剂分子(S)对吸附剂表面活性中
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心发生竞争吸附（未进样时，所有的吸
附剂活性中心吸附的是S）。 3．离子交换色谱法
离子交换色谱法是以离子交换剂作 为固定相。离子交换色谱法是基于离子
交换树脂上可电离的离子与流动相中具
有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，
依据这些离子交换剂具有不同的亲和力
而将它们分离。凡是在溶剂中能够电
反离子)加到流动相或固定相中， 使其与
溶质离子结合形成疏水型离子对化合物，
从而控制溶质离子的保留行为。 离子对色谱法(特别是反相)解决了 针对乳制品中三聚氰胺的检测，国家质检总局日前建议采用三种检测方 法，高效液相色谱法是其中之一。本文主要介绍高效液相色谱法及高效液相
色谱仪相关原理。 “ ”乳制品生产监管 11 September’ 2008
以往难以分离的混合物的分离问题，诸
离
如酸、碱和离子、非离子混合物，特
的物质通常都可以用离子交换色谱法
别
来
是一些生化试样如核酸、核苷、生物
进行分离。
碱
4．离子对色谱法
以及药物等分离。
离子对色谱法是将一种(或多种)与
5．离子色谱法
溶质分子电荷相反的离子(称为对离子
以离子交换树脂为固定相，电解质
或
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