欧阳科创编 2024.02.05
AKTA蛋白纯化系统操作
时间：2024.02.05 创作：欧阳科 AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、
AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等
多种型号的设备。以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍
AKTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA。
AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。它们是：
FIG 1、AKTA EXPLORER主机
? Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。在AKTAexplorer 100，流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。在AKTA explore10，流速范围0.001-10 ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。
? Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。）
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? Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图
AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。打开装阀的门可全部看到。柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。 2、一般操作
2.1 开机
按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。UNICORN的操作界面分为四个窗口（Fig 3）
Fig 3、Unicorn的操作界面
2.2
准备工作溶液和样品
所有的工作溶液和样品必须经过0.45μm的滤膜过
滤，样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱
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气10min。
2.3
清洗及管道准备
首先将A泵的进液管道（A1）放入缓冲液或平衡液
中，将B泵的进液管道(B1)放入高盐溶液中，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 pump→pump wash explorer，选中A1,B1管道为ON， execute。泵清洗将自动结束。(Fig 4)
Fig 4、AKTA Explorer的泵清洗操作
2.4安装层析柱
在manual里选择pump→flow rate，输入一定的低流速（Fig 5），insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料或层析柱的耐受压力，以较低者为设置值，具体可在填料说明书或层析柱说明书中查到），insert，execute（Fig 6）。待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
Fig 5、AKTA Explorer的流速设定操作 Fig 6、AKTA Explorer的限压设定操作
2.5 开始纯化：
1）在柱子平衡好之后（电导，pH的数值和变化趋势稳定）即开始上样了。此时应将紫外调零（Fig 7），
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AKTA蛋白纯化系统操作之欧阳科创编
