今泰学院推荐文档
真核细胞rna提取的实验报告范文3篇
An experimental report on RNA extraction from eukaryotic cells
第 1 页 共 14 页
今泰学院推荐文档
真核细胞rna提取的实验报告范文3篇
小泰温馨提示：实验报告是把实验的目的、方法、过程、结果等记录下来，经过整理，写成的书面汇报。本文档根据实验报告内容要求展开说明，具有实践指导意义，便于学习和使用，本文下载后内容可随意修改调整及打印。
本文简要目录如下：【下载该文档后使用Word打开，按住键盘
Ctrl键且鼠标单击目录内容即可跳转到对应篇章】
1、篇章1：真核细胞RNA的提取文档 2、篇章2：真核细胞RNA的提取文档 3、篇章3：真核细胞rna提取文档
篇章1:真核细胞RNA的提取文档 一．原理
本方法利用盐酸胍抑制RNA酶，匀浆裂解细胞，采用有
机溶剂抽提去除蛋白质。通过选择性沉淀RNA分子去除DNA。 二．方法
第 2 页 共 14 页
今泰学院推荐文档
⑴组织样品处理：取新鲜的组织样品称重后，剪碎成约
1cm2的组织块直接加入匀浆液中进行RNA提取，或液氮中速冻-70℃保存。
⑵贴壁培养细胞处理：用PBS洗细胞一次，吸干溶液后
将培养板快速移至液氮中冷冻后转到-70℃保存；或加入1ml匀浆至培养板中直接裂解细胞，然后将粘稠的裂解液进一步匀浆。
⑶悬浮培养细胞处理：离心收集细胞，用PHS悬浮漂洗
再田心收集，若不立即提取RNA，则可经液氮速冻后转至一70℃贮存备用。
2．加l倍体积盐酸胍匀浆液[至准备好的样品细胞中，
高速匀浆1min。
3．匀浆液5000g，室温离心10min。
4．将上清移至一个干净离心管中，加入0.1体积的3mol
／L乙酸钠（PH5.2），混匀，再加5体积预冷的乙醇，立即充分混匀，-20℃放置至少2小时。 燥。
5．5000g 0℃离心10分钟沉淀核酸，弃上清液，室温干
第 3 页 共 14 页
今泰学院推荐文档
6、每个提取RNA的组织或细胞样品中，加入l0～15min
盐酸胍匀浆液Ⅱ，搅拌溶解。
7．加入2.5体积预冷的乙醇，立即充分混匀，-20℃至
少放置2小时。
8．5000g 0℃离心10分钟沉淀核酸，去上清，室温挥发
乙醇。
9．按每克组织细胞加5min的比例．分两次加入0.02mol
／L EDTA（pH8.0） 先加1／2体积EDTA振荡l～2分钟，3000g离心2min．吸出上清．再加另一个1/2体积的EDTA振荡l一2分钟．合并两次核酸溶解液。．
10．用等体积氯仿—正丁醇（4：1）抽提核酸溶液，
5000g室温离心l0min，5000g室温离心10min。吸出上清至另一个干净离心管中。
11．加3倍体积lmol／L乙酸钠 （PH7.0） 混匀，-20℃放置1h以上，此时RNA将选择地沉淀，而DNA仍为溶解状况。
12．5000g，0℃离心20min，沉于管底的是RNA。
13．吸去上清，用4℃预冷的lmol／L乙酸钠（pH7．0）
漂洗RNA沉淀。然后20℃ 5000g，离心20分钟。回收RNA。
第 4 页 共 14 页
今泰学院推荐文档
14．尽量去除上清液。按每g组织细胞1m的比例加入
RNA溶解液（0.2％SDS，0.5％mol／L EDTA，pH8.0）。注意：若有SDS沉淀析出．滴加0.11mol／L NaOH调溶液pH至7．5。 15．加入2倍体积冰预冷乙醇混匀，0℃放置至少2小时，5000g，4℃离心10分钟，RNA沉淀用70％乙醇漂洗，短暂离心后，弃上清，室温干燥蒸发乙醇。
16．用适当小容积DEPC处理过的ddH2O溶解RNA沉淀，
加入3倍体积乙醇，
-70℃保存RNA备用。用时．加入0.1体积的3mol／L乙
酸钠，混匀，120xxg，4℃离心回收RNA。 三.试剂
成分：8mol／L盐酸胍（分子量为95.6），O．1mol／L
乙酸钠（pH5．2），5mmol／L 2—巯基乙醇，0.5％十二烷基肌氨酸钠
配制方法：取191g盐酸胍．加8.35m1 3mol／L乙酸钠
（pH5．2）和6．25ml 0．2mol／L 2—琉基乙醇溶液中，再加水至237．5ml，混匀后加12．5ml 10％十二烷基肌氨酸钠,振荡混匀溶解。
第 5 页 共 14 页
真核细胞rna提取的实验报告范文3篇
