实验方法
2.3.1品质指标
2.3.1.1失重率的调查
参考鲁周民等（2004）的方法，随机取20个果，称量记录原始重量，并于包装后称量其初始重量，分别在处理后5，10，15，20，25，30天再称重，按公式计算失重率：失重率=（初始重－调查时重）/原始重 ×100% 2.3.1.2腐烂率的调查
参照鲁周民等（2004）的方法，随机取20个果，分别在贮藏5，10，15，25，35d后进行调查，按下列公式计算腐烂率：
腐烂率=腐烂果数/原始果数×100% 2.3.1.3腐烂指数调查
参照刘勤等（1994）方法，按腐烂情况划分为5级，0级：无腐烂；1级：腐烂面积小于果实表25%；2级：腐烂面积占果实表面（25%～50%）；3级：腐烂面积占果实表面（50%～75%）；4级：腐烂面积大于果实表面75%.
腐烂指数 ＝∑（级别×该级果数）/ (总果数×最高级值) ×100％ 2.3.1.4硬度的测定
枇杷果实剥皮后用硬度计测量果肉硬度，每次测定5个果，取平均值。 2.3.1.5总酸含量的测定
参照韩雅珊（1996）方法，随机取样7个果实，称取100克左右果肉，加入100ml蒸馏水，用均质器打成匀浆，取20克匀浆用蒸馏水定容至100ml，过滤收集滤液，标准NaOH溶液滴定，以苹果酸计算。 （1）0.050mol/l 氢氧化钠
（2）1％酚酞指示剂 称取1克酚酞，溶解于100ml70％～90％乙醇中。 2.样品的测定
称取100～200克果肉，加入同样重量的蒸馏水，用均质器打成匀浆，取40克匀浆用蒸馏水定容至100ml，充分混合，过滤收集滤液备用。
吸取20ml滤液，加酚酞指示剂2滴，用0.050mol/l的氢氧化钠标准溶液滴定，至初成淡红色在半分钟不褪色为止，记下氢氧化钠的用量V。重复三次取其平均值。
四、计算
含酸量（％）＝ V×0.05 ×0.067 ×100×100%
20 40
2.3.1.6可溶性总糖的测定
取上述匀浆1.0g，转入试管中，加10ml蒸馏水，于沸水中提取30min，之后用滤纸虑入50ml容量瓶中，然后从中吸取1ml糖溶液，稀释，定容50ml容量瓶中，蒽酮比色法测定。
可溶性糖含量（%）=从回归方程中求得的糖含量×提取液量×稀释倍数×
100/（吸取样品液的体积×样品干重×106） 2.3.1.7可溶性固形物含量的测定
随机取样5个果实，去皮去核后使用四层纱布把果汁充分挤出，用玻璃棒蘸少量汁液，使用日本产ATAGO N-1α手持折光仪测定可溶性固形物含量。 2.3.1.8维生素C含量的测定
参照李合生（2000）方法，随机取样7个果实，称取100克果肉，加入100ml 2%草酸溶液，用均质器打成匀浆，取20克匀浆用2%草酸定容至100ml，过滤收集滤液，2，6－二氯靛酚染料滴定法测定。
每100g鲜样的VC含量=（滴定量-空白量）×标定系数×定容体积×100、（样品质量×吸取样品体积） （单位毫克） 2.3.2生理生化指标
2.3.2.1呼吸强度的测定
参照邹奇（1995）方法，随机取3个果实，准确称重后，置于连接在红外线CO2分析仪气路的800ml密闭塑料杯中，25℃下用GXH－305型红外线CO2气体分析仪测定，空气流量1.0 L/min。记录CO2浓度从270～280 uL/L变化所用时间，以单位质量果实单位时间内生成的CO2量表示呼吸速率（mgCO2·kg-1·h-1）。 呼吸速率（mgCO2·kg-1·h-1）=ul/L*40L*44g/mol*103*60/(106*22.4mol/L×kg) 色差：
1. 2. 1 色差仪评价果实颜色（国艳梅，杜永臣，王孝宣，等.利用色差仪估测番茄果实番茄红素含量的研究[J].中国蔬菜，2008，（11）：10-14.） 色差仪L*（ 从黑到白 ,0～100） 、a （从绿到红 , - a～ + a ）、b （从蓝到黄 , - b～ +b ）3个方面分别评价果实颜色。色调（Hue） 和饱和度 （Chroma） 是利用 a 值和 b 值计算得到的果实颜色评价系数。Hue确定红黄绿蓝紫等颜色以及这些基本色之间的颜色 ,180°表示纯绿色 ,90°表示黄色 , 45°表示橘红色 , 0°表示纯红色。Chroma反映了色素的浓度。 2.4 数据处理
试验结果取三次测定的平均值，使用软件Excel作图，相关性分析采用统计软件SPSS 10.0。
提取：（SOD，POD，CAT）
0.2g样品→加入1.6ml 预冷的50 mM pH 7.8 PBS, 4 ℃研磨→12,000 g 离心for 20 min at 4 ℃→取上清。 测定： SOD
药品配置：
（1）50 mM PBS (pH7.8) ：8.5ml NaH2PO4 + 91.5ml Na2HPO4→用蒸馏水稀
释到400ml，放于4 ℃冰箱保存。以下药品均用pH7.8，50 mM PBS配置，且放于4 ℃冰箱保存
（2）14.5 mM Met：0.5409g→250ml
（3）30uM EDTA: 0.001g→100ml。如果不好称量，可以配置母液后稀释 （4）60 μM核黄素: 0.0023g→100ml 遮光保存 （5）2.25 mM NBT: 0.1804g→100ml
反应混合液：54ml Met (甲硫氨酸) + 0.2ml EDTA + 1.8ml 50 PBS + 2ml NBT + 2ml
核黄素，按照顺序混合，如果样品比较多，可以按比例配置。
测定：酶液+3 ml反应液。酶液都加完后，再统一加反应液，迅速混合均匀。 最大光还原管：酶液量用相同体积的PBS代替 + 3ml 反应液。4000lux 光照
20min后，避光条件下OD560测定。
调零管：用50 mM pH7.8 PBS调零即可 注意事项：
1 酶液量要预先试做，一般掌握在样品测定值为最大光还原值的1/2左右，叶片和根系酶液量也不一样，可分开做。
2 照光要均匀，时间要一致。试管最好选择同一批次购买的，样品间不要互相遮挡。照光后测定时用黑色袋子套住试管，测定一个拿一个 3 加反应液时最好暗光下进行 POD 药品配置：
（1）100 ml 0.2M PBS (pH6.0)：87.7ml NaH2PO4 + 12.3ml Na2HPO4 反应混合液：50 ml 0.2M PBS (pH 6.0) + 0.019 ml 愈创木酚（2-甲氧基酚）+ 0.028
ml H2O2
PBS +愈创木酚→加热搅拌，直至愈创木酚完全溶解（看不到愈创木酚油滴为止）→冷却后→加入30%H2O2→混合均匀，测定。可以测定前预先配置好，冰箱中短暂保存。
测定： 3 ml反应液+酶液→迅速混合均匀→OD470测定，测定时间变化，记录初始值和终止值。黄瓜上酶液一般用40ul,反应时间为40秒。以你反应速度为准，严格上值应呈线性上升。
调零管：用0.2M PBS (pH6.0)调零即可 CAT： 药品配置：
（1）100 ml 0.15M PBS (pH7.0)：29.25ml NaH2PO4 + 45.75ml Na2HPO4→稀释到100ml
反应混合液：100 ml 0.15M PBS (pH7.0) + 0.1546 ml H2O2
测定： 3 ml反应液+酶液→迅速混合均匀→OD240测定。黄瓜上酶液一般用100ul,反应时间为40秒。以你反应速度为准，严格上值应呈线性下降。 调零管：用0.15M PBS (pH7.0)调零即可
酶的提取是采用改进的Wong 和Lee 的方法制取丙酮粉, 过程如下:将冷冻的菊芋取出, 在水浴中解冻4h , 称取100g果肉,迅速加入200ml 冰丙酮( - 20 ℃) , 用高速组织捣碎机捣碎5min , 抽滤,残渣用冰丙酮反复冲洗, 再抽滤, 直至成为白色粉末, 放置室温干燥一夜后, 称重, 用滤纸包好, 标明日期放入-20℃冰箱中保存.本试验用缓冲液为0. 1mol/ g 柠檬酸—0. 2mol/ l 磷酸二氢钠。
酶液制取: 取0.5g 丙酮粉, 加入15ml 最适pH的缓冲液( 4 ℃) 于研钵中, 置冰浴中研碎, 在10000r/ min 下离心20min , 取上清液, 即为粗酶提取液, 置于冰浴中待测。
ppo酶活测定方法：PPO活性测定参照Coseteng速率法[6]并加以改进：取0.10mol/L柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH6.2)2.6mL,分别与0.20mol/L邻苯二酚
（底物）0.3mL混合,28℃水浴中预热5min,加入0.1mLPPO提取液, 立即用生化自动分析仪在420nm处测定OD值。每隔10s读取一次OD值。以每mL酶液在1min内引起吸光值增加0.001所需的量为一个酶活性单位(以unit/min表示)。以上测定均重复3次。
脂肪氧合酶(LOX)测定
根据罗云波等的方法 ,加以改进。从3 个果实中取2 g 果肉组织置于研钵中加入10 mL 经4 ℃预冷的50 mmol/ L (pH7.0) 磷酸缓冲液,冰浴匀浆,15 000 ×g( 4 ℃) 离心15 分钟, 上清液用于脂肪氧合酶(LOX) 的测定。
3 ml 反应体系中含有(100 mmol/ L) 母液50μL ,磷酸盐缓冲液(100 mmol/
L ,pH6.8) 2.75 mL ,酶液0.2 mL ,于234nm 处测定吸光度变化。加酶后15 秒计时, 记录1 分钟内吸光度的变化, 酶活以OD234/ (min·gFW) 表示。3 次重复。
木质素含量测定
取一定量样品,用95%乙醇研磨,并定溶至5ml,离心,95%乙醇清洗沉淀3次，再用酒精：正己烷=1：2溶液冲洗3次，吹干。加2ml 25%溴乙酰醋酸溶液，于70℃保温30min后，加入0.9ml 2mol/LNaOH中止反应。另加5ml乙酸和0.1ml 7.5mol/L氯化羟胺，用乙酸定溶至10ml，280nm处测定吸光值。
许安邦,林维宣主编(1994).食品分析.北京:中国轻工出版社,200～213
实验方法 2.3.1品质指标 2.3.1.1失重率的调查 参考鲁周民等(2004)的
