HPLC法测定化香虫茶中没食子酸和鞣花酸的含量
周丹水1，张礼行1，廖玮涛1，倪维鞠1，郭聪颖1，龙俊2，龙勇江2，曾宇1，3
【摘 要】摘要: 目的 建立双波长RP-HPLC法测定化香虫茶中没食子酸、鞣花酸质量分数。方法 采用COSMOSIL C18-AR-Ⅱ色谱柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.1%(体积分数)H3PO4，梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，检测波长为269 nm(没食子酸)、254 nm(鞣花酸)，柱温为25 ℃。结果 没食子酸和鞣花酸分别在0.052～0.26、0.21～1.24 μg范围内呈良好的线性关系，醇提物的没食子酸和鞣花酸平均回收率分别为98.03%、102.99%，RSD分别为1.10%、1.09%。水提物的没食子酸和鞣花酸平均回收率分别为98.85%、99.08%，RSD分别为2.74%、2.78%。结论 本方法操作简便、准确、重复性良好，可用于化香虫茶中没食子酸、鞣花酸质量分数的测定。 【期刊名称】广东药科大学学报 【年(卷),期】2019(000)003 【总页数】5
【关键词】关键词: 高效液相色谱法； 化香虫茶； 没食子酸； 鞣花酸； 含量测定 药物分析
基金项目: 贵州省科技创新项目(2018440001000142) 网络出版时间：2019-05-27 11:26:17
络出版地址：
http://kns.cnki.net/kcms/detail/44.1733.R.20190527.1126.004.html 化香虫茶，又名龙珠茶、化香金茶，是以夜蛾科亥夜蛾属黄纹淡黑夜蛾
(Hydrillodes morosa Butler)的幼虫取食胡桃科植物化香树(Platycarya strobilacea Sieb. et Zucc.)叶后所排泄出的虫粪，收集加工制成的产品，主要产地是广西、贵州、湖南，具有清凉解渴、去暑解毒、提神健胃等功效，是传统虫茶品种之一[1-2]。化香虫茶的上游植物株化香树体内含有丰富的鞣质[3]，鞣质的水解产物包括没食子酸和鞣花酸，现代药理实验表明这2种物质均具有抗肿瘤、抗氧化及抗菌等作用[4-8]。
目前虽有关于化香树中分离鉴定没食子酸和鞣花酸的研究报道[9],但对化香虫茶中这2种成分质量分数测定的报道极少。因此，本实验采用HPLC法，测定化香虫茶中没食子酸、鞣花酸的质量分数，为化香虫茶的物质基础及开发利用提供参考。
1 仪器与试药
Waters 2956液相色谱仪(美国Waters公司)；COSMOSIL C18-AR-Ⅱ色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm，日本Nacalai Tesque株式会社)；没食子酸对照品(成都曼思特生物科技有限公司，批号：MUST-18032801)；鞣花酸对照品(成都曼思特生物科技有限公司，批号：MUST-18052603)。4批化香虫茶均经广东药科大学中药学院李书渊教授鉴定为夜蛾科亥夜蛾属黄纹淡黑夜蛾(Hydrillodes morosa Butler)的幼虫取食胡桃科植物化香树(Platycarya strobilacea Sieb. et Zucc.)叶后所排泄出的虫粪，标本存放于广东药科大学中药分析实验室,来源信息见表1。乙腈为色谱纯(德国Merck公司)；H3PO4为色谱纯(天津科密欧化学试剂有限公司)；水为纯净水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为COSMOSIL C18-AR-Ⅱ色谱柱(250 mm×4.6mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.1%(体积分数)H3PO4溶液，洗脱程序见表2。流速为1.0 mL/min，检测波长为269(没食子酸)、254 nm(鞣花酸)，柱温为25 ℃，进样量为10 μL。 2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制备成质量浓度为0.026 01 mg/mL的对照品溶液；精密称取鞣花酸对照品适量，加二甲基亚砜二甲基亚砜(DMSO)制备成质量浓度为0.051 57 mg/mL的对照品溶液。 2.2.2 供试品溶液的制备 取化香虫茶2.5 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加70%乙醇50 mL，加热回流1 h，滤过。残渣同法再提取1次，滤过，合并滤液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，摇匀,作为化香虫茶醇提物母液。吸取1 mL母液置10 mL容量瓶中,加甲醇置刻度，摇匀,用微孔滤膜 (0.22 μm)滤过,即得。化香虫茶水提物的制备除采用的提取溶剂为蒸馏水外，其余步骤与醇提物相同。 2.3 系统适用性试验
分别精密吸取“2.2”项下对照品、供试品溶液10 μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，见图1。结果显示，没食子酸、鞣花酸均与相邻色谱峰分离度良好。 2.4 标准曲线的绘制
2.4.1 没食子酸标准曲线的绘制 精密吸取“2.2.1”项下的没食子酸对照品溶液，分别进样 2、4、6、8、10 μL，按“2.1”项下色谱条件测定。以进样量为横坐标，测得的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y1=2.790 117×106X1-2.946 0×104，r1=0.999 4。结果表明没食子酸在0.052～0.26
HPLC法测定化香虫茶中没食子酸和鞣花酸的含量
