经过沙黄染色后的巨噬细胞呈暗红色，细胞内染色不均匀白色呈星状分布。此时在100x物镜油镜下观察可见大部分细胞中有细小棕黑色颗粒，在细胞中不规则分布，每个细胞中数量差异较大，密度也不同。左下示意图中可见密度较高，较为显著，右下分布则较为稀疏，颜色也较浅。关于棕黑色颗粒大小、分布、数量差异的具体探讨见第六节讨论一。 2. 对照组：
对照组一 对照组二
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在对照组一中，由于使用80摄氏度的生理盐水处理，在此温度下，大量细胞被破坏脱落，残余细胞较少，且疑似细胞内容物被破坏，染色很浅，依稀可见淡红色细胞轮廓。未见棕黑色细小颗粒。
在对照二中，工作液未添加β-甘油磷酸钠，用蒸馏水代替，酸性磷酸酶无反应底物，故后续反应也无法进行。染色情况与实验组基本相同，但是未见细小棕黑色颗粒。
六． 实验讨论 1. 实验结论：
运用代谢产物间接观察的方法，根据实验组观测结果，巨噬细胞的酸性磷酸酶集中分布于细胞质的一些细小颗粒中，查询资料推测为溶酶体；故巨噬细胞中的酸性磷酸酶集中分布于溶酶体中。
根据对照实验可知，有活性的酸性溶菌酶和反应底物是该观测方法的必须因素，该观察酸性磷酸酶的方法科学有效。
2. 讨论一：为什么在巨噬细
胞中，棕黑色细小颗粒的分布和数量有很大差异？ a) 巨噬细胞成熟程度不同，所含溶酶体的数量也不同。
b) 巨噬细胞中有初级溶酶体和次级溶酶体。
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初级溶酶体是刚从高尔基体分离出，只含有溶酶体酶的细胞小泡。较小，光镜下呈更为细小的棕黑色颗粒 次级溶酶体是同时含有消化中的细胞底物和溶酶体酶的消化泡，体积较大。在光镜下呈较大的棕黑色颗粒。 c) 注射进入腹腔中的淀粉肉汤分布不均匀，处于外源性异物更多的区域的巨噬细胞会产生更多的溶酶体。部分细胞可能已经消化了大部分胞吞的外源性异物，溶酶体数量与体积均较小。
3. 讨论二：如果标本液在工作液中孵育时间过久，可能会出现什么现象？
酸性磷酸酶将会持续催化反应进行，反应产物大量堆积，甚至导致溶酶体破裂，反应产物弥漫。这些产物在经过后续步骤后都会在光镜下呈棕黑色沉淀，脱离酸性磷酸酶原来位置而不规则分布。所以可能会导致“视野中随机大量分布棕黑色物资”从而干扰了“观察酸性磷酸酶在细胞中的分布”这一目的。
4. 讨论三：实验结果中观测到的棕黑色物质，就是酸性磷酸酶吗？
不是，棕黑色物质是硫化铅沉淀。是磷酸代谢酶在工作液中的代谢产物经过一系列的后续显色过程产生的棕黑色沉
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淀。我们通过观察这一物质的分布，从而推断出酸性磷酸酶在细胞中的分布情况。
七． 参考文献
[1] 李素文.《细胞生物学实验指导》[M].高等教育出版社，2015(3):46-48. [2] 翟中和，王喜忠，丁明孝等.《细胞生物学》[M].高等理科教育，2004(1):95-98.
[3] 黄瑛,石玉秀.脊髓前角原代培养细胞 ACP 酶的观察[J].第四军医大学吉林军医学院学报,2001,(1):18-19. DOI:10.3969/j.issn.1673-2995.2001.01.009.
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酸性磷酸酶的检测实验报告 - 图文
