武汉软件工程职业学院教案（附页）
一硅胶GF254薄层板上，以己烷－丙酮－二乙胺(8.5:1:0.5) 为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3个；其杂质斑点与对照溶液(2)的主斑点比较，不得更深；如有一点超过，应不深于对照溶液(1)的主斑点。 5.特殊杂质检查 盐酸硫利达嗪中的有关物质检查 对光不稳定，无杂质对照品，TLC高低浓度对比法 第三节苯并二氮杂卓类药物 一、结构与性质 （1）含氮杂原子、六元和七元环双环并合而成，其中1,4-苯并二氮杂卓类药物是目前临床应用最广泛的抗焦虑、抗惊厥药。如：地西泮、硝基地西泮、艾司唑仑、氯氮卓、阿普唑仑、三唑仑、盐酸氟西泮、氯硝西泮和奥沙西泮等，其中，除了氯氮卓外，均为地西泮的衍生物。 H3CNH3CONNNHNONOHClNClNClNClNOHNCH3 地西泮阿普唑仑奥沙西泮氯氮卓 （2）化学性质 碱性： 非水溶液滴定法测定含量 水解： 在强酸性溶液中，形成二苯甲酮衍生物，具有的特性可用于鉴别和含有测定 鉴别试验 1.沉淀反应 氯氮卓稀盐酸溶液、阿普唑仑稀盐酸溶液、盐酸氟西泮水溶液、氯硝西泮稀盐酸溶液加碘化铋钾试液显现橙红色沉淀。 2.水解后呈芳伯胺反应 （第6页）
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氯氮卓和奥沙西泮的盐酸溶液(1→2)，缓缓加热煮沸，放冷，加亚硝酸钠和碱性β-萘酚试液，生成橙红色沉淀，后者放置后颜色变暗。 HONHNCH3NH2NNHClNO+NaNO2ClOOHClO△ 3.硫酸－荧光反应： 苯并二氮杂卓类药物溶于硫酸/稀硫酸在紫外光(365nm)下显不同的颜色。 4.氯化铜焰色反应 分子结构含有氯元素，在铜网上燃烧发出氯化铜的绿色火焰。 二、鉴别试验 （1）酸水解产物的薄层色谱法 苯并二氮杂卓类经酸水解后生成二苯甲酮衍生物，但专属性差，不同的药物可能水解产生相同的二苯甲酮衍生物（三唑仑、阿普唑仑等经水解后不产生二苯甲酮衍生物，可以区别）。 特殊杂质检查 TLC是本类药物较为常用的检查方法，HPLC法在杂质检查中的应用也逐渐增加。 例：氯氮卓（USP24、BP2000采用薄层色谱法） HPLC检查法： 色谱条件：色谱柱：C18柱；流动相：甲醇－磷酸液(0.05mol/L)(60:40),40%氢氧化钠调pH6.0；流速1ml/min，检测波长254nm。 结果：灵敏度高，可检测未知结构的痕量杂质。 特殊杂质检查 HPLC法用于地西泮降解产物的检查 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－水(70:30) 为流动相；检测波长为254nm 。理论板数按地西泮峰计算应不低于1500，地西泮峰和内标物质峰的分离度应符合要求。 检查方法：取本品，加甲醇分别制成每1ml中含1mg的供试品溶液和每1ml中含5μg的对照溶液。照含量测定项下的色谱条件进行试验，取对照溶液10μl（第7页）
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注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为记录仪满量程的10％；再准确量取上述两种溶液各10μl分别进样，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍，供试品溶液的色谱图中主成分峰之后如显示杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液主成分峰的峰面积。 三、含量测定 比色法 （1）酸性染料比色法 原理：在适当的介质中，碱性药物(B) 可与氢离子结合成(BH+)，而一些酸性染料可解离为(In-)，两者定量结合成有色络合物(BH+In-)离子对，可被有机溶剂定量提取，在一定波长处测定其吸收，即可算出碱性药物的含量。 （2）钯离子比色法 原理：吩噻嗪类药物的二价硫在pH2±0.1缓冲液中可与钯离子(Pb2+)形成红色络合物，10min呈色完全，可稳定2hour，在500nm波长附近有最大吸收，最适宜范围50μg~ 250μg。 （3）紫外分光光度法 萃取后分光光度法 碱化，有机溶剂萃取游离型碱，使其与制剂辅料分离，再用分光光度法测定 （4）萃取－双波长分光光度法 碱化，有机溶剂萃取，在254nm、277nm波长处测定吸收，用吸收度之差计算含量，以消除抗氧剂的干扰。 （5）气相色谱法 分离效能好、灵敏度高、选择性好、用量少、分析速度快，有机碱或其盐类均可直接GC分析，但盐解离的酸对色谱柱和检测器会损害，因此一般将生物碱盐的水溶液先碱化，用有机溶剂提取游离碱后再分析。 （6）高效液相色谱法 反相高效液相色谱法用于杂环类药物分析一般加入扫尾剂二乙胺或三乙胺。
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14《药物分析》第八章(2课时)
