库尔勒香梨萼端黑斑病发生的原因
摘 要：2007―2009年，在新疆库尔勒地区，香梨在贮藏期发生一种此前极少发生的病害，即萼端黑斑。为了探明该病害的发生原因，对香梨健康果与萼端黑斑果果实品质、矿质元素等方面进行了比较研究，同时对黑斑病果进行病原学鉴定。结果表明，香梨萼端黑斑病果实较健果可溶性固形物含量低，且病果中公梨(花萼宿存或未脱落净的)所占比例高达80％；矿质元素测定结果表明，病果中Ca含量低于健果，而N／Ca、K／Ca均高于健果，且果实花萼端钙含量最低，氮含量以及N，Ca、K／Ca最高。柯赫氏证病法结果显示，分离得到的枝孢霉属(Cladosporium cladosporioides)和链格孢属(Alternaria alternata)真菌为非致病菌。初步认为，库尔勒香梨萼端黑斑病是一种由于果实品质下降和N／Ca、K／Ca失调及缺钙引起的生理性病害。
库尔勒香梨(Pyrus sinkiangensis Yu)为新疆特产，果实具有皮薄、果肉酥脆、水分多、渣滓少、含糖量高、风味浓郁等优点，是我国超市占有率最高、销售范围最广、销售时间最长、国产梨销售价格最高的梨品种，也是我国主要的出口梨品种。2009年香梨在贮藏至翌年4月份后果实萼端产生黑斑，发生率为4％～10％，严重者甚至达20％，给贮藏货主和贮藏企业造成较大经济损失，该病害在2007年曾有零星发生，但未造成重大经
济损失。作为库尔勒香梨贮藏期间的一种新病害，其发病原因尚不清楚。我们通过果园及冷藏库实地调研及比较萼端黑斑病果实与健果的品质、矿质元素等方面的差异，以及病原菌鉴定等方式，探明香梨萼端黑斑病发病原因，旨在为防治该病提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 材料
材料选自新疆库尔勒市源田冷库、世光仓储冷库(果实在冷库中贮藏近8个月)，每个冷库分别随机抽取病果、健果各20个。于2009年5月18日收到由新疆库尔勒香梨研究中心空运的病果及其对照样品，当日在中国农业科学院果树研究所测定。并于2009年5月20―23日赶赴新疆库尔勒进行实地调研与果实品质测定，调查的企业包括世光仓储冷库、源田冷库和拓普冷库，分公梨(花萼宿存或未脱落净的)、母梨(花萼全部脱落)和病果、健果进行品质测定，每个样本容量为30个果。 1.2 方法
1.2.1 生理指标测定 (1)单果质量采用电子天平称量(Shanghai sun ACS-3000A，上海旭日衡器XX公司，g)；(2)可溶性固形物含量(Soluble Solids Con―tent，SSC)PR-101α折光仪，日本ATAGO公司，％；(3)总糖含量采用滴定法测定，方法参见NY／T 1278―2007；(4)可滴定酸含量(Titratable Acid，TA)测定，瑞士万通808智能电位滴定仪(％)；(5)果实硬度(53205型数据可输式硬度计，意大利，kg?cm-2)；(6)公梨所占
百分率(％)=公梨个数／总果数×100；(7)果皮底色采用日本美能达CR-400色差仪测定，所用光源为D65光源，其中在Lab色空间中，H值表示色度角，其值高低反映果皮底色转黄程度，H值越低，果皮底色越黄。
1.2.2 矿质元素测定(1)N的测定：采用凯氏法测定，所选仪器为福斯公司kjeltec2300的自动定氮仪，方法参见GB／T 5009，3-2003；(2)P、K、Ca、B等矿质元素采用岛津公司ICPE-9000等离子发射光谱仪测定，方法参见NY／T 1653-2008。 1.2.3 病样采集、病原菌分离与致病性测定病原菌的分离采用常规组织分离法，即切取香梨黑斑病果实的病健交界处组织，置于PDA培养基上，25℃培养至菌落直径达2.0cm，挑取菌落边缘新生菌丝进行纯化，经单孢分离后保存在PDA培养基试管斜面上。另将纯化菌株平板培养至产孢，镜检，确定病原菌类型。用针刺接种法和无伤接种法，将分离到的2株菌种孢悬液分别接种到健康香梨果实上，另将2菌株混合孢悬液接种到香梨果实上，保湿培养进行致病性测定，接种试验期间环境温度平均为20.5℃。
1.2.4 数据分析采用SPSS 13.0统计分析软件进行数据分析处理。
2 结果与分析
2.1 香梨萼端黑斑病症状描述
香梨黑斑病果实萼端深绿，硬度较高。初期萼端果皮变黑，
切开表皮，果肉有浅褐色蜂窝状坏死，果肉稍苦。发病后期病部产生轻微的塌陷，萼端产生黑色霉层，病斑边缘处果皮变黑，果肉内部病健交界明显，病部呈蜂窝状且有黏稠墨汁状物质(图版―A～C)。
2.2 果实品质对香梨萼端黑斑病发生的影响
品质测定结果表明，病果单果质量和果实硬度均显著高于健果，可溶性固形物和可溶性糖含量病果均显著低于健果，病果公梨多，母梨少，公梨较母梨硬度大、单果质量、品质差(表1,2)。病果果皮颜色日值低于健果，说明病果较健果果皮颜色更黄，可滴定酸含量病果与健果差异不显著。
2.3 矿质元素对香梨萼端黑斑病发生的影响
如表3所示，香梨果皮Ca含量远高于果肉，无论是果皮还是果肉，病果中Ca含量均明显低于健果相应部位，其中病果中Ca含量较健果低33>78％。病果N、P、K、B含量均高于健果，病果中N／Ca和K／Ca均高于健果。试验结果也表明，果皮中的Ca与N、K呈显著负相关，相关系数分别为0.985和0.955(图1,2)。在对果实不同部位矿质元素比较过程中发现，果实花萼端钙含量最低，氮含量以及N／Ca、K／Ca最高。 2.4 香梨黑斑病病原菌鉴定
通过对病健交界处果肉进行分离培养，镜检纯化病原菌，共分得菌种2株，经病原学鉴定，分得的菌株分别为(1)枝孢霉属Cladosporium cIadospori―oides，(2)链格孢属Auernaria
alternata，其中以枝孢霉属所占比重较高，达80％。 对分离得到的2株菌株进行柯赫氏法则验证。其致病性测定结果显示，针刺接种均可使香梨萼端产生病斑，如图版―D～F所示，回接枝孢霉属产生了较小的黑色病斑，而回接链格孢属产生了边缘褐色软腐状的病斑，混合接种病斑边缘也呈软腐状，但并未产生典型的自然发病症状。说明它们不是萼端黑斑病的致病菌，也进一步说明萼端黑斑病不是一种真菌侵染病害。 3 讨论
3.1 果实品质的作用
库尔勒香梨萼端黑斑病病果公梨所占百分比明显高于母梨，一方面，公梨大多花萼宿存，处于张开状态，因此，自然界中普遍存在的真菌容易顺花萼侵入果实内部形成霉层，另一方面，公梨果个大、品质差。研究结果也表明，发生萼端黑斑病的果实可溶性固形物含量和可溶性糖含量均较健果低，可见，黑斑病的发生与果实品质有着一定关系。另据调查发现，该病主要在贮藏后期发病，气调库较普通低温库发病轻，低温库部分果心发黄、发褐。上述结果表明，香梨萼端黑斑与果实衰老密切相关，品质相对较差的果实更易衰老。 3.2 矿质元素的作用
测定结果表明，萼端黑斑病病果果实Ca素含量明显低于健果，N／Ca、K／Ca均高于健果，果实中Ca的含量与生理性病害的发生有直接关系，Ca可以维持细胞膜稳定性以及细胞完整性，
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